Roche cobas s 201 system Manual do usuário
- Tipo
- Manual do usuário
02/2007, versão 1.0 2.1
Pipetagem 2
Conceito de batch
O sistema cobas s 201 foi concebido para processar amostras em batches.
Um batch é um conjunto de amostras e controlos que são pipetados,
extraídos, amplificados e detectados conjuntamente, de acordo com as
regras da especificação de teste associada.
Um batch é constituído por todas as amostras e controlos de uma
bandeja SK24.
Um batch é rastreado a partir da pooling através da análise de resultados
utilizando a ID de bandeja SK24 e uma ID de batch exclusiva atribuída
durante a pipetagem.
As amostras e os controlos do batch são rastreados associando a leitura das
respectivas IDs de códigos de barras com os clipes de códigos de barras
exclusivos que alojam tubos-S (durante a pooling e a preparação de
amostra) e tubos-K (durante a amplificação e detecção).
Figura 2.1
Batch
ID da bandeja SK24
Clipe de código de barras
exclusivo de tubos-S
2.2 02/2007, versão 1.0
Controlos externos fabricados pela Roche
(RMECs)
Todos os batches precisam de Controlos externos fabricados pela Roche
(RMECs). O número de RMECs necessários é específico do teste.
Os testes MPX englobam cinco analitos. Por cada batch, devem ser
pipetados cinco RMECs positivos e um RMEC negativo. Durante a
pipetagem, uma alíquota do controlo negativo é transferida para o tubo-S
na posição 19 de cada bandeja SK24. Em seguida, as alíquotas de cada
controlo positivo são transferidas para os tubos-S nas posições 20 a 24 de
cada bandeja SK24 (Figura 2.2).
A pipetagem dos RMECs ocorre sempre antes da pipetagem de
amostra. Isto permite ao operador corrigir quaisquer erros de
pipetagem de controlos antes de começar a pipetagem de amostra.
Os RMECs são sempre colocados nas últimas posições de cada
bandeja SK24, para que todo o processo de teste, desde a extracção até
à amplificação e detecção, seja controlado por amostras de controlo.
Figura 2.2
RMECs de MPX numa bandeja SK24
Controlo
negativo
Controlos
positivos
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.3
Controlos externos definidos pelo utilizador
(UDECs)
O sistema cobas s 201 permite que até cinco controlos externos definidos
pelo utilizador (UDECs) sejam atribuídos a cada teste. Os requisitos do
UDEC, incluindo o nome do controlo, o padrão do código de barras,
número de lote, data de expiração e posição dos UDECs na bandeja SK24,
são especificados pelo administrador do laboratório.
Uma vez atribuídos os UDECs para um determinado teste, o operador
pode determinar se os vai incluir numa execução de pipetagem.
Se incluídos, os UDECs são sempre pipetados na primeira bandeja
SK24.
Os UDECs estão identificados nos relatórios e ecrãs Roche PDM Pooling
Manager e Roche PDM Data Manager.
2.4 02/2007, versão 1.0
Placas de poços fundos
Durante a pipetagem de Pools Primárias grandes (Figura 2.3), são
utilizadas placas de poços fundos idênticas, como Placas Biblioteca e
Placas Intermédias.
Todas as placas de poços fundos têm a sua etiqueta de código de
barras exclusiva.
Placa Biblioteca
Uma Placa Biblioteca pode ser preparada durante a Pooling Primária para
guardar uma alíquota de cada tubo de dador no caso de ser necessária uma
Pooling Secundária.
A Pooling Secundária pode ser executada directamente a partir dos
tubos de dador, se não estiver preparada uma Placa Biblioteca ou se
um determinado poço da Placa Biblioteca não puder ser utilizado.
A utilização de uma Placa Biblioteca é uma opção que é
configurada durante a instalação.
A posição de poço que uma amostra ocupa na Placa Biblioteca
depende do número de amostras da execução e do tipo de pooling
que está a ser executado.
Placa Intermédia
É necessária uma Placa Intermédia para a pipetagem de Pool Primárias
grandes. A Placa Intermédia aloja provisoriamente pools de 12 amostras
que são depois combinadas para formar uma Pool Primária grande.
Na secção seguinte, descreve-se detalhadamente a pipetagem de
Pools Primárias grandes.
Figura 2.3
Placa Biblioteca e Placa Intermédia
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.5
Pools Primárias
Uma Pool Primária grande é uma pool de várias amostras (
n
= 24, 48 ou
96 amostras de dador) que é criada para os testes de amostra iniciais.
A pipetagem de Pools Primárias grandes é um processo de dois passos que
consiste em 1) uma Execução de Placa e 2) uma Execução de Batch. Cada
uma delas é uma execução de pipetagem separada.
Execução de Placa
Durante uma Execução de Placa, alíquotas de grupos de amostras de
dador são combinadas nos poços da Placa Intermédia para criar pools
provisórias de12
amostras
.
O número de amostras de dador que são carregadas deve ser múltiplo do
tamanho da pool final (24, 48 ou 96). O número máximo de amostras de
dador que podem ser pipetadas depende do pipetador que é utilizado:
• Podem ser pipetadas até 864 amostras de dador quando é utilizado
o pipetador Hamilton Microlab STAR IVD
• Podem ser pipetadas até 384 amostras de dador quando é utilizado
o pipetador Hamilton Microlab STARlet IVD
A pipetagem de uma Execução de Placa para uma pool de 96 amostras é
resumida a seguir. A pipetagem de uma Execução de Placa para uma pool
de 24 ou 48 amostras é similar.
• 1 ml de cada amostra de dador é aspirado do primeiro grupo de
tubos de amostras de dador e dispensado nos poços de uma Placa
Biblioteca. O processo é então repetido com alíquotas de 700 µl dos
mesmos tubos de amostras de dador, resultando assim numa
transferência de 1,7 ml de alíquotas de amostras de dador para os
poços correspondentes da Placa Biblioteca (Figura 2.4).
• 135 µl são aspirados dos poços da Placa Biblioteca e dispensados na
primeira coluna de poços da Placa Intermédia (utilizados para
armazenar pools provisórias) (Figura 2.4).
2.6 02/2007, versão 1.0
Se não estiver preparada uma Placa Biblioteca, as alíquotas de
135 µl são pipetadas directamente para a Placa Intermédia a partir
dos tubos de amostras de dador.
• O processo é então repetido com o grupo seguinte de amostras de
dador. 1,7 ml de cada amostra de dador do grupo são transferidos
para os seguintes poços disponíveis da Placa Biblioteca, e 135 µl são
então aspirados desses poços da Placa Biblioteca e dispensados na
mesma coluna de poços da Placa Intermédia que a do primeiro
grupo de amostras de dador (Figura 2.5).
• O processo continua até que todas as amostras de dador que estão
incluídas na primeira Pool Primária grande tenham sido pipetadas
e os poços da primeira coluna de poços da Placa Intermédia
contenham alíquotas de doze amostras de dador
• O processo inteiro é repetido em seguida para criar pools
provisórias para cada Pool Primária grande adicional, utilizando
poços adicionais da Placa Intermédia para pools provisórias
adicionais.
Figura 2.4
Pipetagem do primeiro grupo de amostras de dador durante uma Execução de Placa
(Exemplo de uma Execução de Placa para uma Pool Primária de 96 amostras)
Placa Biblioteca
Placa Intermédia
Suporte de tubos de dador
1 ml +700 µl
135 µl
Posição 1
Posição 32
com 32 posições
Figura 2.5
Pipetagem do grupo seguinte de amostras de dador durante uma Execução de Placa
(Exemplo de uma Execução de Placa para uma Pool Primária de 96 amostras)
Placa Biblioteca
Placa Intermédia
Suporte de tubos de dador
1 ml +700 µl
135 µl
Posição 1
Posição 32
com 32 posições
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.7
No final da Execução de Placa, a(s) Placa(s) Biblioteca conterão alíquotas
de 1,565 ml de cada um dos tubos de amostras de dador, e os poços da
Placa Intermédia que são utilizados conterão cada um 135 µl de alíquotas
em pool de doze tubos de amostras de dador.
Execução de Batch
Durante uma Execução de Batch, são pipetadas alíquotas dos poços da
Placa Intermédia para tubos-S para criar a Pool Primária grande
(Figura 2.6):
• Alíquotas de 500 µl de dois poços são pipetados para um tubo-S
para um tamanho de Pool Primária de 24
• Alíquotas de 250 µl de quatro poços são pipetados para um tubo-S
para um tamanho de Pool Primária de 48
• Alíquotas de 125 µl de oito poços são pipetados para um tubo-S
para um tamanho de Pool Primária de 96
Podem ser carregadas Placas Intermédias de mais de uma Execução de
Placa. O número máximo de Placas Intermédias que podem ser pipetadas
depende do pipetador que é utilizado:
• Podem ser pipetadas até 5 Placas Intermédias quando é utilizado o
pipetador Hamilton Microlab STAR IVD
• Podem ser pipetadas até 4 Placas Intermédias quando é utilizado o
pipetador Hamilton Microlab STARlet IVD
Figura 2.6
Pipetagem de duas pools de 96 amostras durante uma Execução de Batch
Placa Intermédia
125 µl
2.8 02/2007, versão 1.0
Execução de Batch de Repetição
Uma Execução de Batch de Repetição
cria outra Pool Primária grande
para substituir uma com um
resultado inválido
.
Uma Execução de Batch
de Repetição utiliza a Placa Intermédia que foi criada durante o primeiro
passo (a Execução de Placa) da execução da Pooling Primária original.
Uma Execução de Batch de Repetição tem de ser pipetada a partir
da Placa Intermédia. Se um poço da Placa Intermédia não estiver
disponível, as amostras são programadas para uma Pooling de
Resolução.
Quando efectuar uma Execução de Batch de Repetição, podem ser
carregadas Placas Intermédias de mais de uma execução de Pooling
Primária. O número máximo de Placas Intermédias que podem ser
pipetadas numa Execução de Batch de Repetição depende do pipetador
que é utilizado:
• Podem ser pipetadas até 5 Placas Intermédias quando é utilizado o
pipetador Hamilton Microlab STAR IVD
• Podem ser pipetadas até 4 Placas Intermédias quando é utilizado o
pipetador Hamilton Microlab STARlet IVD
Durante uma Execução de Batch de Repetição, alíquotas dos mesmos
poços da Placa Intermédia utilizados para criar a Pool Primária grande
original (página 2.7) são pipetadas para tubos-S para criar a Pool Primária
de substituição (Figura 2.7).
Figura 2.7
Execução de Batch de Repetição para uma Pool Primária de 48 amostras
250 µl
Placa Intermédia
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.9
Pooling 2D
A Pooling 2D (pooling bidimensional) é utilizada para testar novamente
amostras de Pools Primárias grandes reactivas. Durante uma Pooling 2D,
cada amostra é pipetada para duas pools diferentes com uma distribuição
de amostras (Figura 2.8) que permite que a(s) amostra(s) não-reactivas
sejam identificadas após uma única execução.
As amostras de uma Pool Primária podem ser processadas durante
uma execução de Pooling 2D.
O número de Pools 2D que são criadas depende do tamanho da Pool
Primária grande reactiva:
Figura 2.8
Distribuição de amostras em Pools 2D
(Exemplo de uma Pooling 2D para uma Pool Primária de 48 amostras)
Placa Biblioteca
Pool Primária 2
Pool Primária 1
Pools de seis amostras
Posições 1-8 de tubos-S
Pools de oito amostras
Posições 9-14 de tubos-S
Ta manh o
da Pool
Número de Pools 2D Alíquota de cada amostra
24 4 pools de 6 amostras
6 pools de 4 amostras
167 µl
250 µl
48 8 pools de 6 amostras
6 pools de 8 amostras
167 µl
125 µl
96 Dois batches, cada um
contendo:
8 pools de 6 amostras
6 pools de 8 amostras
167 µl
125 µl
2.10 02/2007, versão 1.0
A pipetagem de uma Execução de Pooling 2D para uma pool de
48 amostras é resumida a seguir. A pipetagem de uma Execução de
Pooling 2D para uma pool de 24 ou 96 amostras é similar.
Se não for utilizada uma Placa Bibloteca, se um poço da Placa
Biblioteca for inválido ou se um poço da Placa Biblioteca contiver
volume insuficiente, podem ser pipetadas alíquotas de tubos de
amostras de dador.
• Alíquotas de 167 µl de amostras de dador são aspiradas a partir de
quatro poços da primeira coluna de poços da Placa Biblioteca e são
dispensadas em quatro tubos-S, começando na posição 1 da
bandeja SK24 (Figura 2.9).
• Alíquotas de 125 µl de amostra de dador são então aspiradas a
partir dos mesmos quatro poços da Placa Biblioteca e dispensadas
num único tubo-S na posição 9 da bandeja SK24.
• Alíquotas de 167 µl de amostras de dador são aspiradas a partir de
quatro poços da coluna de poços seguinte da Placa Biblioteca e são
dispensadas em quatro tubos-S, começando na posição 5 da
bandeja SK24.
• Alíquotas de 125 µl de amostra de dador são aspiradas a partir dos
mesmos quatro poços da Placa Biblioteca e dispensadas num único
tubo-S na posição 9 da bandeja SK24.
Neste momento, os tubos-S das posições 1 a 8 de cada bandeja
SK24 conterão cada um deles uma alíquota de uma única amostra
de dador, e o tubo-S da posição 9 conterá uma alíquota de oito
amostras de dador (Figura 2.9).
Figura 2.9
Pipetagem dos primeiros Oito poços
(Exemplo de uma Pooling 2D para uma Pool Primária de 48 amostras)
Placa Biblioteca
Posição 9
167 µl
125 µl
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.11
• O processo é então repetido para os oito poços seguintes da Placa
Biblioteca. Alíquotas de 167 µl de amostras de dador são
novamente dispensadas para tubos-S nas posições 1 a 8 da bandeja
SK24, e alíquotas de 125 µl são dispensadas para um único tubo-S
na posição 10 da bandeja SK24 (Figura 2.10).
• O processo continua até que todas as amostras de dador tenham
sido pipetadas.
Quando a execução termina, os tubos-S das posições 1 a 8 de cada
bandeja SK24 conterão cada um deles alíquotas de seis amostras de
dador, e os tubos-S das posições 9 a 14 conterão cada um deles
alíquotas de oito amostras de dador.
Figura 2.10
Pipetagem dos oito poços seguintes
(Exemplo de uma Pooling 2D para uma Pool Primária de 48 amostras)
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
167 µl
125 µl
2.12 02/2007, versão 1.0
Pooling de Confirmação
Uma Pooling de Confirmação é utilizada para testar novamente amostras
de Pools Primárias grandes reactivas quando existe alguma evidência
adicional (por ex., um teste de serologia positivo) que aponta que uma ou
mais amostras da Pool Primária são reactivas.
A Pooling de Confirmação também é utilizada para testar
novamente Pools Curtas.
As amostras que se suspeite serem reactivas são pipetadas em pools
individuais. As amostras restantes são colocadas em pools de várias
amostras (Figura 2.11).
As amostras de uma Pool Primária podem ser processadas durante
uma execução de Pooling de Confirmação.
Podem ser seleccionadas até quatro amostras de uma Pool Primária
de 48 ou 96 para pipetagem em pools de amostra única. Podem ser
seleccionadas até duas amostras de uma Pool Primária de 24 para
pipetagem em pools de amostra única.
As pools de várias amostras são preparadas como pools de 12, 11, 6 ou
4 amostras, consoante: 1) o número de amostras da Pool Primária e 2) o
número de amostras de dador seleccionadas para testes individuais. O
volume de amostra que é aspirado para cada tamanho de pool de várias
amostras é resumido a seguir:
Figura 2.11
Distribuição de amostras em Pools de Confirmação
(Exemplo de uma Pooling de Confirmação para uma Pool Primária de 48 amostras)
Placa Biblioteca
Pool Primária 2
Pool Primária 1
Pools de várias amostras
Posições 1-4 de tubos-S
Pools de amostra única
Posições 5-8 de tubos-S
Tamanho da pool de
várias amostras
Alíquota de cada amostra
12 amostras 92 µl
11 amostras 92 µl
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.13
A pipetagem durante uma Pooling de Confirmação é resumida a seguir:
Se não for utilizada uma Placa Bibloteca, se um poço da Placa
Biblioteca for inválido ou se um poço da Placa Biblioteca contiver
volume insuficiente, podem ser pipetadas alíquotas de tubos de
amostras de dador.
• Alíquotas (92 µl, 167 µl ou 250 µl) de amostras de dador são
aspiradas dos poços do primeiro grupo de poços da Placa
Biblioteca presumidos não-reactivos. Cada aspiração de amostra é
dispensada para um tubo-S, começando na posição 1 de uma
bandeja SK24.
• O processo é repetido, saltando os poços (ou tubos de dador) de
quaisquer amostras de dador que se suspeite serem reactivas
(Figura 2.12).
6 amostras 167 µl
4 amostras 250 µl
Tamanho da pool de
várias amostras
Alíquota de cada amostra
Figura 2.12
Pipetagem de Pools de Confirmação presumidas não-reactivas
(Exemplo de uma Pooling de Confirmação para uma Pool Primária de 48 amostras)
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
92 µl
2.14 02/2007, versão 1.0
• Após todas as alíquotas de amostras de dador presumidas não-
reactivas tenham sido pipetadas, 1 ml de alíquotas de amostras de
dador presumidas reactivas são aspiradas dos respectivos poços (ou
tubos de dador) e dispensadas em tubos-S individuais (Figura 2.13).
Figura 2.13
Pipetagem de pools individuais presumidas reactivas
(Exemplo de uma Pooling de Confirmação para uma Pool Primária de 48 amostras)
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
1 ml
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.15
Pooling de Resolução
Uma Pool de Resolução é uma pool de amostra única que é criada para
amostras que 1) tiveram erros de pipetagem durante a execução da
Pooling Primária ou 2) estão contidas numa Pool de Confirmação reactiva
ou numa Pool 2D reactiva. Uma Pool de Resolução é preparada pipetando
uma alíquota de uma Placa Biblioteca para o seu próprio tubo-S.
O administrador do laboratório também pode optar por utilizar
uma Pooling de Resolução para resolver resultados inválidos.
A amostra pode ser aspirada do tubo de dador, se não estiver
disponível uma Placa Biblioteca ou se o poço da Placa Biblioteca
para essa amostra de dador não puder ser utilizado.
Podem ser processadas até 36 amostras durante uma execução de
Pooling de Resolução.
Durante uma Pooling de Resolução, 1 ml de uma amostra é aspirado do
seu poço na Placa Biblioteca e dispensado num único tubo-S.
Figura 2.14
Pipetagem de Pools de Resolução
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
1 ml
Poços seleccionados para
a Pooling de Resolução
2.16 02/2007, versão 1.0
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Roche cobas s 201 system Manual do usuário
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