Roche cobas s 201 system Manual do usuário
- Tipo
- Manual do usuário
02/2007, versão 1.0 2.1
Pipetagem 2
Conceito de batch
O sistema cobas s 201 foi concebido para processar amostras em batches.
Um batch é um conjunto de amostras e controlos que são pipetados,
extraídos, amplificados e detectados conjuntamente, de acordo com as
regras da especificação de teste associada.
Um batch é constituído por todas as amostras e controlos de uma bandeja
SK24.
Um batch é rastreado a partir da pooling através da análise de resultados
utilizando a ID de bandeja SK24 e uma ID de batch exclusiva atribuída
durante a pipetagem.
As amostras e os controlos do batch são rastreados associando a leitura das
respectivas IDs de códigos de barras com os clipes de códigos de barras
exclusivos que alojam tubos-S (durante a pooling e a preparação de
amostra) e tubos-K (durante a amplificação e detecção).
Figura 2.1
Batch
ID da bandeja SK24
Clipe de código de barras
exclusivo de tubos-S
2.2 02/2007, versão 1.0
Controlos externos fabricados pela Roche
(RMECs)
Todos os batches precisam de Controlos externos fabricados pela Roche
(RMECs). O número de RMECs necessários é específico do teste.
Os testes MPX englobam cinco analitos. Por cada batch, devem ser
pipetados cinco RMECs positivos e um RMEC negativo. Durante a
pipetagem, uma alíquota do controlo negativo é transferida para o tubo-S
na posição 19 de cada bandeja SK24. Em seguida, as alíquotas de cada
controlo positivo são transferidas para os tubos-S nas posições 20 a 24 de
cada bandeja SK24 (Figura 2.2).
Os testes WNV englobam um único analito. Por cada batch, deve ser
pipetado um RMEC negativo e um RMEC positivo. Durante a pipetagem,
uma alíquota do controlo negativo é transferida para o tubo-S na posição
23 de cada bandeja SK24. Em seguida, uma alíquota do controlo positivo é
misturada com uma segunda alíquota do controlo negativo (obtida de um
segundo tubo de controlo negativo para diluir o controlo positivo) no
tubo-S na posição 24 de cada bandeja SK24. (Figura 2.3).
A pipetagem dos RMECs ocorre sempre antes da pipetagem de
amostra. Isto permite ao operador corrigir quaisquer erros de
pipetagem de controlos antes de começar a pipetagem de amostra.
Os RMECs são sempre colocados nas últimas posições de cada
bandeja SK24, para que todo o processo de teste, desde a
preparação de amostra até à amplificação e detecção, seja
controlado por amostras de controlo.
Figura 2.2
RMECs de MPX numa bandeja SK24
Controlo
negativo
Controlos
positivos
Figura 2.3
RMECs de WNV numa bandeja SK24
Controlo
positivo
Controlo
negativo
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.3
Controlos externos definidos pelo utilizador
(UDECs)
O sistema cobas s 201 permite que até cinco controlos externos definidos
pelo utilizador (UDECs) sejam atribuídos a cada teste. Os requisitos do
UDEC, incluindo o nome do controlo, o padrão do código de barras,
número de lote, data de expiração e posição do UDEC na bandeja SK24,
são especificados pelo administrador do laboratório.
Uma vez atribuídos os UDECs para um determinado teste, o operador
pode determinar se os vai incluir numa execução de pipetagem.
Se incluídos, os UDECs são sempre pipetados na primeira bandeja
SK24.
Os UDECs estão identificados nos relatórios e ecrãs Roche PDM Pooling
Manager e Roche PDM Data Manager.
Placa Biblioteca
Uma Placa Biblioteca (Figura 2.4) pode ser preparada durante a Pooling
Primária para guardar uma alíquota de cada tubo de dador no caso de ser
necessária uma Pooling Secundária.
A Pooling Secundária pode ser executada directamente dos tubos
de dador se não estiver preparada uma Placa Biblioteca ou se um
determinado poço da Placa Biblioteca não puder ser utilizado.
A posição de poço que uma amostra ocupa na Placa Biblioteca
depende do número de amostras da execução e do tipo de pooling
que está a ser executado.
Figura 2.4
Placa Biblioteca
2.4 02/2007, versão 1.0
Pools Primárias de 1
Uma Pool Primária de 1 é uma pool de amostra única que é criada para os
testes iniciais de amostras. Uma Pool Primária de 1 é preparada pipetando
uma alíquota de um tubo de dador para o seu próprio tubo-S.
O número máximo de tubos de amostras de dador que podem ser
pipetados numa execução de Pool Primária de 1 depende do ensaio, do
pipetador que é utilizado e das dimensões dos tubos de dador.
Durante uma execução de Pool Primária de 1, é aspirado 1 ml de cada
amostra de dador de cada tubo de amostra de dador do primeiro grupo e
dispensado no seu próprio tubo-S (Figura 2.5).
Ensaio Pipetador Hamilton Microlab
STAR
IVD
Pipetador Hamilton Microlab
STARlet IVD
tubos de 7 ml tubos de 10 ml tubos de 7 ml tubos de 10 ml
MPX 216 216 90 90
WNV 264 264 88 88
Figura 2.5
Pipetagem de Pools Primárias de 1
Bandeja SK24
Suporte de tubos de dador
1 ml
Posição 32
Posição 1
com 32 posições
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.5
Se estiver a ser preparada uma Placa Biblioteca, 1 ml de cada amostra de
dador é depois aspirado de cada tubo de amostra de dador e dispensado
no seu próprio poço da Placa Biblioteca. Uma quantidade adicional de 135
µl é então aspirada dos mesmos tubos de amostras de dador e dispensada
nos mesmos poços da Placa Biblioteca, resultando num volume total de
1,135 ml em cada poço (Figura 2.6).
Figura 2.6
Pipetagem de uma Placa Biblioteca para Pools Primárias de 1
Placa Biblioteca
Suporte de tubos de dador
Posição 32
Posição 1
1 ml +135 µl
com 32 posições
2.6 02/2007, versão 1.0
Pools Primárias de 6
Uma Pool Primária de 6 é uma pool de seis amostras que é criada para os
testes iniciais de amostras. Uma Pool Primária de 6 é preparada
combinando alíquotas iguais de seis tubos de amostras de dador num
tubo-S.
O número máximo de tubos de amostras de dador que podem ser
pipetados numa execução de Pool Primária de 6 depende do ensaio, do
pipetador que é utilizado e das dimensões dos tubos de dador.
O número de amostras de dador que são carregadas tem de ser
múltiplo de 6.
Durante uma execução de Pool Primária de 6, 1 ml de cada amostra de
dador é aspirada de cada tubo de amostra de dador do primeiro grupo e
dispensado no seu próprio poço de uma Placa Biblioteca. Uma quantidade
adicional de 700 µl é então aspirada dos mesmos tubos de amostras de
dador e dispensada nos mesmos poços da Placa Biblioteca, resultando
assim numa transferência de 1,7 ml de amostra de dador para cada poço
correspondente de uma Placa Biblioteca. Finalmente, 167 µl são aspirados
de cada poço da Placa Biblioteca e dispensados em tubos-S, começando na
posição 1 da primeira bandeja SK24 (Figura 2.7).
Ensaio Pipetador Hamilton Microlab
STAR
IVD
Pipetador Hamilton Microlab
STARlet IVD
tubos de 7 ml tubos de 10 ml tubos de 7 ml tubos de 10 ml
MPX 432 432 216 216
WNV 480 480 264 264
Figura 2.7
Pipetagem do primeiro grupo de tubos de amostra de dador para Pools Primárias de 6
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
Suporte de tubos de dador
1 ml +700 µl
167 µl
Posição 32
Posição 1
com 32 posições
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.7
Após o primeiro grupo de amostras de dador ter sido pipetado, são
pipetadas alíquotas do grupo seguinte de amostras de dador nos poços
seguintes disponíveis da Placa Biblioteca, e depois uma alíquota de cada
um desses poços é também pipetada, começando na posição 1 da primeira
bandeja SK24 (Figura 2.8).
Este processo continua até que cada um dos tubos-S contenha 167µl de
alíquotas em pool de seis amostras de dador e a Placa Biblioteca contenha
uma alíquota de 1,533 ml de cada um dos tubos de amostras de dador.
Se não estiver preparada uma Placa Biblioteca, as alíquotas de
167 µl são pipetadas directamente para os tubos-S a partir dos
tubos de amostras de dador.
Figura 2.8
Pipetagem do grupo seguinte de tubos de amostra de dador para Pools Primárias de 6
Equipamento COBAS AmpliPrep
Bandeja de amostras
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
1 ml +700 µl
167 µl
Suporte de tubos de dador
Posição 32
Posição 1
com 32 posições
2.8 02/2007, versão 1.0
Pools Simultâneas de 6
Pools Simultâneas de 6 são duas pools de seis amostras que são criadas
para os testes iniciais de amostras. As Pools Simultâneas de 6 são
preparadas combinando alíquotas iguais de seis tubos de amostras de
dador em cada um de dois tubos-S.
O número máximo de tubos de amostras de dador que podem ser
pipetados numa execução de Pool Simultânea de 6, depende do ensaio e
das dimensões dos tubos de dador.
O número de amostras de dador que são carregadas tem de ser
múltiplo de 6.
Durante uma execução de Pool Simultânea de 6, 1 ml de cada amostra de
dador é aspirada de cada tubo de amostra de dador do primeiro grupo e
dispensado no seu próprio poço de uma Placa Biblioteca. Uma quantidade
adicional de 700 µl é então aspirada dos mesmos tubos de amostras de
dador e dispensada nos mesmos poços da Placa Biblioteca, resultando
assim uma transferência de 1,7 ml de amostra de dador para cada poço
correspondente de uma Placa Biblioteca. Finalmente, 334 µl são aspirados
de cada poço da Placa Biblioteca e 167 µl são dispensados em cada um dos
dois tubos-S, começando na posição 1 das duas bandejas SK24
(Figura 2.9).
Ensaio Pipetador Hamilton Microlab
STAR
IVD
Pipetador Hamilton Microlab
STARlet IVD
tubos de 7 ml tubos de 10 ml tubos de 7 ml tubos de 10 ml
MPX e WNV 396 396 N/A N/A
Figura 2.9
Pipetagem do primeiro grupo de tubos de amostra de dador para Pools Simultâneas de 6
Placa Biblioteca
Suporte de tubos de dador
1 ml + 700 µl
167 µl
Posição 32
Posição 1
167 µl
Bandeja SK24
Bandeja SK24
com 32 posições
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.9
Após o primeiro grupo de amostras de dador ter sido pipetado, são
pipetadas alíquotas do grupo seguinte de amostras de dador nos poços
seguintes disponíveis da Placa Biblioteca, e é também pipetada uma
alíquota de cada um destes poços, começando na posição 1 das duas
bandejas SK24.
Este processo continua até que cada um dos tubos-S contenha 167µl de
alíquotas em pool de seis amostras de dador e a Placa Biblioteca contenha
uma alíquota de 1,466 ml de cada um dos tubos de amostras de dador.
Se não estiver preparada uma Placa Biblioteca, são aspirados 334 µl
directamente dos tubos de amostra de dador, e são dispensados
167 µl em cada um dos dois tubos-S.
2.10 02/2007, versão 1.0
Pools de 6 de Repetição
Uma Pool de 6 de Repetição é uma pool de seis amostras que é criada para
testar novamente as amostras de dador de uma Pool Primária de 6 com
um resultado de teste inválido. Uma Pool de 6 de Repetição é preparada
combinando alíquotas iguais de seis poços de uma Placa Biblioteca num
tuboS.
A Pool de 6 de Repetição tem de conter as mesmas amostras de dador
que originalmente compunham a pool da Pool Primária de 6.
O número máximo de amostras que podem ser pipetadas na execução de
uma Pool de 6 de Repetição depende do ensaio e do pipetador que é
utilizado.
Durante a execução de uma Pool de 6 de Repetição, 167 µl de cada uma
das seis amostras são transferidos da Placa Biblioteca para um tubo-S
(Figura 2.10).
Ensaio Pipetador Hamilton
Microlab
STAR IVD
Pipetador Hamilton Microlab
STARlet IVD
tubos de 7 ml tubos de 10 ml tubos de 7 ml tubos de 10 ml
MPX 216 216 216 216
WNV 264 264 264 264
Figura 2.10
Pipetagem de uma Pool de 6 de Repetição a partir da Placa Biblioteca
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
167 µl
Poços seleccionados para a
Pooling de Repetição
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.11
Uma amostra pode ser aspirada do tubo de dador, se não estiver
disponível uma Placa Biblioteca ou se o poço da Placa Biblioteca
para essa amostra de dador não puder ser utilizado.
2.12 02/2007, versão 1.0
Pooling de Resolução
Uma Pool de Resolução é uma pool de amostra única que é criada para
identificar a(s) amostra(s) reactiva(s) numa Pool Primária de 6. O
administrador do laboratório também pode optar por executar uma
Pooling de Resolução em vez de uma Pool de 6 de Repetição, para testar
novamente as amostras de uma Pool Primária de 6 inválida. Uma Pool de
Resolução é preparada pipetando uma alíquota de uma Placa Biblioteca
para o seu próprio tubo-S.
O número máximo de amostras que podem ser pipetadas na execução de
uma Pooling de Resolução depende do ensaio e do pipetador que é
utilizado.
Durante uma Pooling de Resolução, 1 ml de uma amostra é aspirado do
seu poço na Placa Biblioteca e dispensado num único tubo-S.
Ensaio
Pipetador Hamilton
Microlab
STAR IVD
Pipetador Hamilton Microlab
STARlet IVD
tubos de 7 ml tubos de 10 ml tubos de 7 ml tubos de 10 ml
MPX 36 36 36 36
WNV 44 44 44 44
Figura 2.11
Pooling de Resolução a partir da Placa Biblioteca
Placa Biblioteca
Bandeja SK24
1 ml
Poços seleccionados para a
Pooling de Resolução
Pipetagem
02/2007, versão 1.0 2.13
Uma amostra pode ser aspirada do tubo de dador, se não estiver
disponível uma Placa Biblioteca ou se o poço da Placa Biblioteca
para essa amostra de dador não puder ser utilizado.
2.14 02/2007, versão 1.0
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