3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) MDA2ECO96, 96 tests, 1 ea Instruções de operação

E. coli O157 (including H7)

2

Product Instructions

MDA2ECO96

Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7)

Kit de détection moléculaire2 – E. coli O157 (incluant H7)

Molekulare Detektion– E. coli O157 (einschl. H7) Nachweis 2

Analisi molecolare 3M di seconda generazione per il rilevamento

di E. coli O157 (compreso H7)

Análisis de Detección Molecular 2 para E. coli O157 (incluido H7)

Moleculaire Detectieanalyse 2 E. coli O157 (inclusief H7)

Molekylär Detektionsanalys 2 – E. coli O157 (inklusive H7)

Molekylær Detektions Analyse 2 - E. coli O157 (inklusive H7)

Molekylær deteksjonstest 2 for E. coli O157 (inkludert H7)

Molekyläärinen testisetti 2 – E. coli O157 (sisältäen H7)

Ensaio para Detecção Molecular 2 de E. coli O157 (incluindo H7)

Δοκιμασία Μοριακής Ανίχνευσης2 - E.coli O157

(εμπεριέχονH7)

Molekularny test do wykrywania 2 — E. coli O157

(w tym H7)

Молекулярная диагностика 2 - E. coli O157 (Включая H7)

Moleküler Tayin Testi 2 - E. coli O157 (H7 Dahil)

病原菌検出アッセイ2 -

E. coli

O157（H7含む）

大肠杆菌

O157（包括 H7）分子检测分析 2





O157(H7)2

󻆠󻮟󻘀󺟏󻱴󺊯󻭸

󼢻󼨷󻉓󻱟󽴔󺅏󼉫󽴔󼕳󼞇

Deteksi Molekuler untuk Pengujian 2 E. coli O157 (Termasuk H7)

EN

DE

FR

IT

ES

NL

SV

DA

NO

FI

PT

EL

PL

RU

TR

JA

ZH

TH

KO

ID

(English)

1

3

Issue Date: 2017-07

Product Instructions

Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7)

Product Description and Intended Use

The 3M™ Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) is used with the 3M™ Molecular Detection System for

the rapid and specic detection of E. coli O157 (including H7) in enriched food and feed samples.

The 3M Molecular Detection Assays use loop-mediated isothermal amplication to rapidly amplify nucleic acid sequences

with high specicity and sensitivity, combined with bioluminescence to detect the amplication. Presumptive positive

results are reported in real-time while negative results are displayed after the assay is completed. Presumptive positive

results should be conrmed using your preferred method or as specied by local regulations

(1, 2, 3)

.

The 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) is intended for use in a laboratory environment by

professionals trained in laboratory techniques. 3M has not documented the use of this product in industries other than food

or beverage. For example, 3M has not documented this product for testing environmental, pharmaceutical, cosmetics,

clinical or veterinary samples. The 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) has not been evaluated

with all possible food products, food processes, testing protocols or with all possible strains of bacteria.

As with all test methods, the source, formulation and quality of enrichment medium can inuence the results.

Factors such as sampling methods, testing protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may also

inuence results. 3M recommends evaluation of the method including enrichment medium, in the user’s environment

using a sucient number of samples with particular foods and microbial challenges to ensure that the method meets the

user’s criteria.

3M has evaluated the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) with Buered Peptone Water ISO.

The 3M™ Molecular Detection Instrument is intended for use with samples that have undergone heat treatment during

the assay lysis step, which is designed to destroy organisms present in the sample. Samples that have not been properly

heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard and should NOT be inserted into the 3M

Molecular Detection Instrument.

3M Food Safety is certied to ISO (International Organization for Standardization) 9001 for design and manufacturing.

The 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) test kit contains 96 tests, described in Table 1.

Table 1. 3M Molecular Detection Assay Kit Components

Item Identication Quantity Contents Comments

3M™ Lysis Solution (LS)

Pink solution in

clear tubes

96 (12 strips of 8 tubes)

580 L of 3M Lysis Solution

per tube

Racked and

ready to use

3M™ Molecular Detection

Assay 2 - E. coli O157

(including H7) Reagent

Tubes

Pink tubes 96 (12 strips of 8 tubes)

Lyophilized specic

amplication and detection mix

Ready to use

Extra caps Pink caps 96 (12 strips of 8 caps) Ready to use

3M™ Reagent Control

(RC)

Clear ip-top

tubes

16 (2 pouches of 8

individual tubes)

Lyophilized control DNA,

amplication and detection mix

Ready to use

Quick Start Guide 1

The Negative Control, not provided in the kit, is a sterile enrichment medium, e.g., BPW ISO. Do not use water as a

Negative Control.

Safety

The user should read, understand and follow all safety information in the instructions for the 3M Molecular Detection System

and the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7). Retain the safety instructions for future reference.

WARNING: Indicates a hazardous situation, which, if not avoided, could result in death or serious injury and/or

property damage.

NOTICE: Indicates a potentially hazardous situation which, if not avoided, could result in property damage.

(English)

2

W WARNING

Do not use the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) in the diagnosis of conditions in

humans or animals.

The user must train its personnel in current proper testing techniques: for example, Good Laboratory Practices,

ISO/IEC 17025

(4)

, or ISO 7218

(5)

.

To reduce the risks associated with a false-negative result leading to the release of contaminated product:

• Follow the protocol and perform the tests exactly as stated in the product instructions.

• Use medium pre-warmed to 41.5 ± 1°C. Do not allow the medium to drop below the incubation temperature range

during sample preparation.

• Store the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) as indicated on the package and in the

product instructions.

• Always use the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) by the expiration date.

• Use the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) with food, feed and food process environmental

samples that have been validated internally or by a third party.

• Use the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) only with surfaces, sanitizers, protocols and

bacterial strains that have been validated internally or by a third party.

• For an environmental sample containing Neutralizing Buer (NB) with aryl sulfonate complex, perform a 1:2 dilution

before testing (1 part sample into 1 part sterile enrichment broth). Another option is to transfer 10 µL of the neutralizing

buer enrichment into the 3M Lysis Solution tubes. 3M™ Sample Handling products which include 3M™ Neutralizing

Buer with aryl sulfonate complex: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, XSLSSL10NB, HS10NB and

HS119510NB.

To reduce the risks associated with exposure to chemicals and biohazards:

• Perform pathogen testing in a properly equipped laboratory under the control of trained personnel. Incubated

enrichment media and equipment or surfaces that have come into contact with incubated enrichment media may

contain pathogens at levels sucient to cause risk to human health.

• Always follow standard laboratory safety practices, including wearing appropriate protective apparel and eye

protection while handling reagents and contaminated samples.

• Avoid contact with the contents of the enrichment media and reagent tubes after amplication.

• Dispose of enriched samples and associated contaminated waste according to current local/regional/national/

industry standards.

• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.

• Do not exceed the recommended heating time.

• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert temperature

(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer). The

thermometer must be placed in the designated location in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert.

To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:

• Always wear gloves (to protect the user and prevent introduction of nucleases).

To reduce the risks associated with exposure to hot liquids:

• Do not exceed the recommended temperature setting on heater.

• Do not exceed the recommended heating time.

• Use an appropriate, calibrated thermometer to verify the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert temperature

(e.g., a partial immersion thermometer or digital thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer). The

thermometer must be placed in the designated location in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert.

NOTICE

To reduce the risks associated with cross-contamination while preparing the assay:

• Use of sterile, aerosol barrier (ltered), molecular biology grade pipette tips is recommended.

• Use a new pipette tip for each sample transfer.

• Use Good Laboratory Practices to transfer the sample from the enrichment to the lysis tube. To avoid pipettor

contamination, the user may choose to add an intermediate transfer step. For example, the user can transfer each

enriched sample into a sterile tube.

• Use a molecular biology workstation containing germicidal lamp where available.

To reduce the risks associated with a false-positive result:

• Never open tubes post amplication.

• Always dispose of the contaminated tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and

away from the assay preparation area.

Consult the Safety Data Sheet for additional information and local regulations for disposal.

If you have questions about specic applications or procedures, please visit our website at www.3M.com/foodsafety or

contact your local 3M representative or distributor.

(English)

3

User Responsibility

Users are responsible for familiarizing themselves with product instructions and information. Visit our website at

www.3M.com/foodsafety, or contact your local 3M representative or distributor for more information.

When selecting a test method, it is important to recognize that external factors such as sampling methods, testing

protocols, sample preparation, handling, and laboratory technique may inuence results.

It is the user’s responsibility in selecting any test method or product to evaluate a sucient number of samples with the

appropriate matrices and microbial challenges to satisfy the user that the chosen test method meets the user’s criteria.

It is also the user’s responsibility to determine that any test methods and results meet its customers’ and suppliers’

requirements.

As with any test method, results obtained from use of any 3M Food Safety product do not constitute a guarantee of the

quality of the matrices or processes tested.

To help customers evaluate the method for various food matrices, 3M has developed the 3M™ Molecular Detection

Matrix Control kit. When needed, use the Matrix Control (MC) to determine if the matrix has the ability to impact the 3M

Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) results. Test several samples, representative of the matrix, i.e.

samples obtained from dierent origin, during any validation period when adopting the 3M method or when testing new or

unknown matrices or matrices that have undergone raw material or process changes.

A matrix can be dened as a type of product with intrinsic properties such as composition and process. Dierences

between matrices may be as simple as the eects caused by dierences in their processing or presentation for example,

raw versus pasteurized; fresh versus dried, etc.

Limitation of Warranties / Limited Remedy

EXCEPT AS EXPRESSLY STATED IN A LIMITED WARRANTY SECTION OF INDIVIDUAL PRODUCT PACKAGING, 3M

DISCLAIMS ALL EXPRESS AND IMPLIED WARRANTIES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO, ANY WARRANTIES

OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR USE. If any 3M Food Safety Product is defective, 3M or its

authorized distributor will, at its option, replace or refund the purchase price of the product. These are your exclusive

remedies. You must promptly notify 3M within sixty days of discovery of any suspected defects in a product and return

it to 3M. Please call Customer Service (1-800-328-1671 in the U.S.) or your ocial 3M Food Safety representative for a

Returned Goods Authorization.

Limitation of 3M Liability

3M WILL NOT BE LIABLE FOR ANY LOSS OR DAMAGES, WHETHER DIRECT, INDIRECT, SPECIAL, INCIDENTAL OR

CONSEQUENTIAL DAMAGES, INCLUDING BUT NOT LIMITED TO LOST PROFITS. In no event shall 3M’s liability under

any legal theory exceed the purchase price of the product alleged to be defective.

Storage and Disposal

Store the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) at 2-8°C. Do not freeze. Keep kit away from light

during storage. After opening the kit, check that the foil pouch is undamaged. If the pouch is damaged, do not use. After

opening, unused reagent tubes should always be stored in the re-sealable pouch with the desiccant inside to maintain

stability of the lyophilized reagents. Store resealed pouches at 2-8°C for no longer than 60 days.

Do not use 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) past the expiration date. Expiration date and

lot number are noted on the outside label of the box. After use, the enrichment medium and the 3M Molecular Detection

Assay 2 - E. coli O157 (including H7) tubes can potentially contain pathogenic materials. When testing is complete, follow

current industry standards for the disposal of contaminated waste. Consult the Safety Data Sheet for additional information

and local regulations for disposal.

Instructions for Use

Follow all instructions carefully. Failure to do so may lead to inaccurate results.

The user should complete the 3M Molecular Detection System operator qualication training, as described in the

“Installation Qualication (IQ) / Operational Qualication (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular Detection

System” document

(7)

.

Periodically decontaminate laboratory benches and equipment (pipettes, cap/decap tools, etc.) with a 1- 5% (v:v in water)

household bleach solution or DNA removal solution.

See Section “Specic Instructions for validated methods” for specic requirements:

Table 3 for enrichment protocols according to AOAC® Ocial Method of Analysis

SM

2017.01

Table 4 for enrichment protocols according to NF Validation certicate 3M 01/18-05/17

Sample Enrichment

Tables 2, 3 or 4 present guidance for enrichment protocols for food. It is the user’s responsibility to validate alternate

sampling protocols or dilution ratios to ensure this test method meets the user’s criteria.

(English)

4

Foods

1. Pre-warm BPW ISO enrichment medium to 41.5 ± 1°C.

2. Aseptically combine the enrichment medium and sample according to Tables 2, 3 or 4. For all meat and highly

particulate samples, the use of lter bags is recommended.

3. Homogenize all matrices except leafy produce and fruit, thoroughly by blending, stomaching, or hand mixing for 2 ±0.2

minutes. Incubate at 41.5 ± 1°C for the appropriate time according to Tables 2, 3 or 4.

Table 2. General enrichment protocols

Sample Matrix

(a)

Sample Size

Enrichment Broth Volume

(mL)

Enrichment

Temperature

(±1°C)

Enrichment

Time (hours)

Raw beef including ground/mince and trim 325 g

975

BPW ISO

(pre-warmed)

41.5 10-18

Raw meats including raw beef, pork, poultry,

lamb, and bison

25 g

225

BPW ISO

(pre-warmed)

41.5 8-18

Leafy produce

(b)

200 g

450

BPW ISO

(pre-warmed)

41.5 18-24

Other foods including fruit

(b)

, vegetables,

fruit/vegetable juices, fresh herbs, raw

seafood, raw eggs, raw milk, cookie dough,

and processed meats

25 g

225

BPW ISO

(pre-warmed)

41.5 18-24

Walnuts or nut mixes containing walnuts

(this protocol is appropriate for other nuts

including pecans, almonds, pistachios,

cashews, and chestnuts,

25 g

225

reconstituted

non-fat dry milk

41.5 18-24

(a) Frozen samples should be equilibrated to 4-8°C before addition to enrichment broth.

(b) Leafy produce and fruit samples should be gently agitated by hand for 5 minutes. Do not blend or stomach.

Specic Instructions for Validated Methods

AOAC® 



2017.01

In AOAC Ocial Method of Analysis

SM

program, the 3M Molecular Detection Assay 2 – E. coli O157 (including H7) was

found to be an eective method for the detection of E. coli O157:H7. The matrices tested in the study are shown in Table 3.

Table 3. Enrichment protocols using pre-warmed BPW ISO at 41.5 ± 1°C according to AOAC

®

Ocial Methods

SM

2017.01

Sample Matrix Sample Size

Enrichment Broth

Volume (mL)

Enrichment Time

(hours)

Homogenized

Raw ground beef (73% lean) 325 g 975 10-18

Manually by hand or by

Stomach

Raw bagged spinach

(a)

200 g

450

18-24

Gently agitated by hand for 5

minutes, do not homogenize

Fresh sprouts 25 g

225

18-24

Gently agitated by hand for 5

minutes, do not homogenize

Frozen blueberries

(a)(b)

25 g 225 18-24

Gently agitated by hand for 5

minutes, do not homogenize

(a) Leafy produce and fruit samples should be gently agitated by hand for 5 minutes. Do not blend or stomach.

(b) Frozen samples should be equilibrated to 4-8°C before addition to enrichment broth.

(English)

5

NF Validation by AFNOR Certication

3M 01/18-05/17

ALTERNATIVE ANALYTICAL METHODS FOR AGRIBUSINESS

http://nf-validation.afnor.org/en

For more information about end of validity, please refer to NF VALIDATION certicate available on the website

mentioned above.

NF VALIDATION Certied method in compliance with ISO 16140-2

(8)

in comparison to ISO 16654

(3)

Scope of the validation: Raw beef meat, raw dairy products, raw fruits and vegetables

Sample preparation: Samples should be prepared according to EN ISO 16654 and EN ISO 6887

(6)

Software Version: See certicate

Table 4. Enrichment protocols using pre-warmed BPW ISO at 41.5 ± 1°C according to NF VALIDATION certied method

3M 01/18-05/17

Protocol

Sample

Size

Enrichment Broth

Volume (mL)

Enrichment Temperature

(±1°C)

Enrichment Time

(hours)

Raw dairy products, raw fruits and

raw vegetables

25 g 225 41.5 18-24

Raw beef meat 25 g 225 41.5 8-24

NOTES:

• Samples larger than 25 g have not been tested in the NF VALIDATION study.

• The recommended protocol interruption points are after enrichment or after sample lysis. Enrichment broth or sample

lysate can be stored at 2-8°C for up to 72 hours. After removing the enrichment broth from storage, resume testing

from Step 1 in the Lysis section. After removing the sample lysate from storage, resume testing from Step 7 in the Lysis

section. The lysate can also be stored at -20°C.

• Short enrichment protocols are sensitive to incubation conditions and the temperatures specied in the protocol must

be followed. The temperature of the waterbath or the incubator where the broths are prewarmed should be veried to

ensure the enrichment broth is reaching the required temperature. The total time for sample preparation, including the

delay between the end of the medium pre-warming step and the beginning of incubation of the food sample, must not

exceed 45 minutes. Using a ventilated incubator during incubation is recommended.

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Speed Loader Tray

1. Wet a cloth or disposable towel with a 1-5% (v:v in water) household bleach solution and wipe the 3M Molecular

Detection Speed Loader Tray.

2. Rinse the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray with water.

3. Use a disposable towel to wipe the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray dry.

4. Ensure the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray is dry before use.

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Chill Block Insert

Place the 3M Molecular Detection Chill Block Insert directly on the laboratory bench: The 3M Molecular Detection Chill

Block Tray is not used. Use the block at ambient laboratory temperature (20-25°C).

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Heat Block Insert

Place the 3M Molecular Detection Heat Block Insert in a dry double block heater unit. Turn on the dry block heater unit and

set the temperature to allow the 3M Molecular Detection Heat Block Insert to reach and maintain a temperature of 100 ± 1°C.

NOTE: Depending on the heater unit, allow approximately 30 minutes for the 3M Molecular Detection Heat Block Insert

to reach temperature. Using an appropriate, calibrated thermometer (e.g., a partial immersion thermometer, digital

thermocouple thermometer, not a total immersion thermometer) placed in the designated location, verify that the 3M

Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.

(English)

6

Preparation of the 3M™ Molecular Detection Instrument

1. Launch the 3M™ Molecular Detection Software and log in. Contact your 3M Food Safety representative to ensure you

have the most updated version of the software.

2. Turn on the 3M Molecular Detection Instrument.

3. Create or edit a run with data for each sample. Refer to the 3M™ Molecular Detection System User Manual for details.

NOTE: The 3M Molecular Detection Instrument must reach and maintain temperature of 60°C before inserting the 3M

Molecular Detection Speed Loader Tray with reaction tubes. This heating step takes approximately 20 minutes and is

indicated by an ORANGE light on the instrument’s status bar. When the instrument is ready to start a run, the status bar

will turn GREEN.

Lysis

1. Allow the 3M Lysis Solution tubes to warm up by setting the rack at room temperature (20-25°C) overnight (16-18 hours).

Alternatives to equilibrate the 3M Lysis Solution tubes to room temperature are to set the 3M Lysis Solution tubes on the

laboratory bench for at least 2 hours, incubate the 3M Lysis Solution tubes in a 37 ± 1°C incubator for 1 hour or place them

in a dry double block heater for 30 seconds at 100°C.

2. Invert the capped tubes to mix. Proceed to next step within 4 hours.

3. Remove the enrichment broth from the incubator.

4. One 3M Lysis Solution tube is required for each sample and the Negative Control (NC) sample (sterile enrichment

medium).

4.1 3M Lysis Solution tube strips can be cut to desired 3M Lysis Solution tube number. Select the number of individual

3M Lysis Solution tubes or 8-tube strips needed. Place the 3M Lysis Solution tubes in an empty rack.

4.2 To avoid cross-contamination, decap one 3M Lysis Solution tubes strip at a time and use a new pipette tip for each

transfer step.

4.3 Transfer enriched sample to 3M Lysis Solution tubes as described below:

Transfer each enriched sample into an individual 3M Lysis Solution tube rst. Transfer the NC last.

4.4 Use the 3M™ Molecular Detection Cap/Decap Tool-Lysis to decap one 3M Lysis Solution tube strip - one strip

at a time.

4.5 Discard the 3M Lysis Solution tube cap – If lysate will be retained for retest, place the caps into a clean container

for re-application after lysis.

4.5.1 For processing of retained lysate, see Appendix A.

4.6 Transfer 20 µL of sample into a 3M Lysis Solution tube unless otherwise indicated in the Protocol Tables 2, 3, and 4.

20 µl

5. Repeat step 4.3 until each individual sample has been added to a corresponding 3M Lysis Solution tube in the strip.

6. Repeat steps 4.1 to 4.6 as needed, for the number of samples to be tested.

7. When all samples have been transferred, transfer 20 µL of NC (sterile enrichment medium e.g. BPW ISO) into a 3M Lysis

Solution tube. Do not use water as a NC.

8. Verify that the temperature of the 3M Molecular Detection Heat Block Insert is at 100 ± 1°C.

9. Place the uncovered rack of 3M Lysis Solution tubes in the 3M Molecular Detection Heat Block Insert and heat for

15 ± 1 minutes

.

During heating, the 3M Lysis solution will change from pink (cool) to yellow (hot).

Samples that have not been properly heat treated during the assay lysis step may be considered a potential biohazard

and should NOT be inserted into the 3M Molecular Detection Instrument.

10. Remove the uncovered rack of 3M Lysis Solution tubes from the heating block and allow to cool in the 3M Molecular

Detection Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes. The 3M Molecular Chill Block Insert,

used at ambient temperature without the 3M Molecular Detection Chill Block Tray, should sit directly on the laboratory

bench. When cool, the lysis solution will revert to a pink color.

(English)

7

11. Remove the rack of 3M Lysis Solution tubes from the 3M Molecular Detection Chill Block Insert.

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplication

1. One 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tube is required for each sample and the NC.

1.1 Tube strips can be cut to desired tube number. Select the number of individual 3M Molecular Detection Assay

2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tubes or 8-tube strips needed.

1.2 Place 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tubes in an empty rack.

1.3 Avoid disturbing the reagent pellets from the bottom of the tubes.

2. Select one 3M Reagent Control tube and place in rack.

3. To avoid cross-contamination, decap one 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tube

strip at a time and use a new pipette tip for each transfer step.

4. Transfer lysate to a 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tube and 3M Reagent

Control tube as described below:

Transfer each sample lysate into individual 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent

Tubes rst followed by the NC. Hydrate the 3M Reagent Control tube last.

5. Use the 3M™ Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to decap the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli

O157 (including H7) Reagent Tube – one tube strip at a time. Discard cap.

5.1 Transfer 20 µL of Sample lysate from the upper ½ of the liquid (avoid precipitate) in the 3M Lysis Solution tube

into corresponding 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tube. Dispense at an

angle to avoid disturbing the pellets. Mix by gently pipetting up and down 5 times.

5.2 Repeat step 5.1 until individual sample lysate has been added to a corresponding 3M Molecular Detection Assay 2

- E. coli O157 (including H7) Reagent Tube in the strip.

5.3 Cover the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tubes with the provided extra

caps and use the rounded side of the 3M Molecular Detection Cap/Decap Tool-Reagent to apply pressure in a

back and forth motion ensuring that the cap is tightly applied.

5.4 Repeat steps 5.1 to 5.3 as needed, for the number of samples to be tested.

5.5 When all sample lysates have been transferred, repeat 5.1 to 5.3 to transfer 20 µL of NC lysate into a 3M Molecular

Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) Reagent Tube.

5.6 Transfer 20 µL of NC lysate into a 3M Reagent Control tube. Dispense at an angle to avoid disturbing the pellets.

Mix by gently pipetting up and down 5 times.

6. Load capped tubes into a clean and decontaminated 3M Molecular Detection Speed Loader Tray. Then close and latch

the lid.

20 µL

7. Review and conrm the congured run in the 3M Molecular Detection Software.

8. Click the Start button in the software and select instrument for use. The selected instrument’s lid automatically opens.

9. Place the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray into the 3M Molecular Detection Instrument and close the lid to

start the assay. Results are provided within 60 minutes, although positives may be detected sooner.

(English)

8

10. After the assay is complete, remove the 3M Molecular Detection Speed Loader Tray from the 3M Molecular Detection

Instrument and dispose of the tubes by soaking in a 1-5% (v:v in water) household bleach solution for 1 hour and away

from the assay preparation area.

NOTICE: To minimize the risk of false positives due to cross-contamination, never open reagent tubes containing

amplied DNA. This includes 3M Reagent Control, 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7)

Reagent Tube, and 3M Matrix Control Tubes. Always dispose of sealed reagent tubes by soaking in a 1-5% (v:v in

water) household bleach solution for 1 hour and away from the assay preparation area.

Results and Interpretation

An algorithm interprets the light output curve resulting from the detection of the nucleic acid amplication. Results are

analysed automatically by the software and are color-coded based on the result. A Positive or Negative result is determined

by analysis of a number of unique curve parameters. Presumptive positive results are reported in real-time while Negative

and Inspect results will be displayed after the run is completed.

Presumptive positive samples should be conrmed as per the laboratory standard operating procedures or by following

the appropriate reference method conrmation

(1,2,3)

, beginning with transfer from the primary BPW ISO enrichment to

secondary enrichment broth(s), followed by subsequent plating and conrmation of isolates using appropriate biochemical

and serological methods.

NOTE: Even a negative sample will not give a zero reading as the system and 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli

O157 (including H7) amplication reagents have a “background” relative light unit (RLU) reading.

In the rare event of any unusual light output, the algorithm labels this as “Inspect.” 3M recommends the user to repeat

the assay for any Inspect samples. If the result continues to be Inspect, proceed to conrmation test using your preferred

method or as specied by local regulations.

In the event of discordant results (presumptive positive with the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157

(including H7), non-conrmed by one of the means described above, and in particular for the latex agglutination test),

the laboratory must follow the necessary steps to ensure the validity of the results obtained.

Conrmation of Results According to the NF VALIDATION Certied Method

In the context of the NF VALIDATION, all samples identied as positive by the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli

O157 (including H7) must be conrmed by one of the following tests:

Option 1: Using the ISO 16654

(3)

standard starting from the buered peptone water

(3)

enrichment.

Option 2: Implementing a conrmation method consisting of the following: Streak 50 L of the buered peptone water

(3)

enrichment onto a Cexime Potassium Tellurite Sorbitol MacConkey (CT-SMAC)

(3)

agar plate. Incubate for 24 ±3 hours at

37°C. Streak characteristic colonies onto nutrient agar and perform latex agglutination test directly onto isolated colonies.

If the 3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) results are not conrmed, perform an immunomagnetic

separation step and then streak 50 L onto CT-SMAC.

Option 3: Using nucleic acid probes as described in the EN ISO 7218

(5)

standard, performed on isolated colonies (puried

or not) from CT-SMAC (see Options 1 or 2). The nucleic acid probes must be dierent from those used in the 3M Molecular

Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7).

Option 4: Using any other method certied NF VALIDATION, the principle of which must be dierent from 3M Molecular

Detection Assay 2 - E. coli O157(including H7). The complete protocol described for this second validated method must be

used. All steps prior to the start of conrmation must be common to both methods.

In the event of discordant results (presumptive positive with the alternative method, non-conrmed by one of the means

described above) the laboratory must follow the necessary steps to ensure the validity of the result obtained.

If you have questions about specic applications or procedures, please visit our website at www.3M.com/foodsafety or

contact your local 3M representative or distributor.

Appendix A. Protocol Interruption: Storage and re-testing of samples

1. To store a heat-treated lysate, re-cap the lysis tube with a clean cap (see Lysis section, 4.5)

2. To store an enriched sample, incubate for a minimum of 18 hours prior to storage.

3. Store at 4 to 8°C for up to 72 hours.

4. Prepare a stored sample for amplication by inverting 2-3 times to mix.

5. Decap the tubes.

6. Place the mixed lysate tubes on 3M Molecular Detection Heat Block Insert and heat at 100 ± 1°C for 5 ± 1 minutes.

7. Remove the rack of 3M Lysis Solution tubes from the heating block and allow to cool in the 3M Molecular Detection

Chill Block Insert at least 5 minutes and a maximum of 10 minutes.

8. Continue the protocol at the Amplication section detailed above.

(English)

9

References:

1. US Food and Drug Administration Bacteriological Analytical Manual. Chapter 4A: Diarrheagenic Escherichia coli.

November 2015.

2. US Department of Agriculture (USDA) FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 5.09. Detection, Isolation and

Identication of Escherichia coli O157:H7 from Meat Products and Carcass and Environmental Sponges. Eective Date:

15 January 2015.

3. ISO 16654:2001 Microbiology of food and animal feeding stus – Horizontal method for the detection of Escherichia

coli O157.

4. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories.

5. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stus – General rules for microbiological examination.

6. ISO 6887. Microbiology of food and animal feeding stus – Preparation of test samples, initial suspension and decimal

dilutions for microbiological examination.

7. Installation Qualication (IQ)/Operational Qualication (OQ) 3M

TM

Molecular Detection System. 3M Food Safety.

Explanation of Symbols

www.3M.com/foodsafety/symbols

3M Health Care

2510 Conway Ave

St. Paul, MN 55144 USA

www.3M.com/foodsafety

3M is a trademark of 3M. Used under license in Canada.

34-8720-4565-2

3

3M Food Safety

3M United States

3M Center

Bldg. 275-5W-05

St. Paul, MN 55144-1000

USA

1-800-328-6553

3M Canada

Post Oce Box 5757

London, Ontario N6A 4T1

Canada

1-800-563-2921

3M Latin America

3M Center

Bldg. 275-5W-05

St. Paul, MN 55144-1000

USA

1-954-340-8263

3M Europe and MEA

3M Deutschland GmbH

Carl-Shurz - Strasse 1

D41453 Neuss/Germany

+49-2131-14-3000

3M United Kingdom PLC

Morley Street,

Loughborough

Leicestershire

LE11 1EP

United Kingdom

+(44) 1509 611 611

3M Österreich GmbH

Euro Plaza

Gebaude J, A-1120 Wien

Kranichberggasse 4

Austria

+(43) 1 86 686-0

3M Asia Pacic

No 1, Yishun Avenue 7

Singapore, 768923

65-64508869

3M Japan

3M Health Care Limited

6-7-29, Kita-Shinagawa

Shinagawa-ku, Tokyo

141-8684 Japan

81-570-011-321

3M Australia

Bldg A, 1 Rivett Road

North Ryde, NSW 2113

Australia

61 1300 363 878

(Français)

1

FR

3

Date de parution: 2017-07

Instructions relatives au produit

Kit de détection moléculaire 2 - E. coli O157 (incluant H7)

Description et utilisation du produit

Le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M™ (incluant H7) est utilisé avec le système de détection moléculaire

3M™ pour une détection rapide et précise de E. coli O157 (incluant H7) dans les échantillons d’aliments enrichis et

d’aliments pour animaux.

Les kits de détection moléculaire 3M utilisent la technique LAMP (amplication isotherme médiée par des boucles) an

d’amplier rapidement les séquences d’acide nucléique de façon extrêmement spécique et sensible, associée à la

bioluminescence pour détecter l’amplication. Les résultats présumés positifs sont visibles en temps réel, tandis que les

résultats négatifs sont achés à la n de l’analyse. Les résultats présumés positifs doivent être conrmés par la méthode

de votre choix ou en utilisant une méthode conforme aux règlementations locales

(1, 2, 3)

.

Le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) est destiné à être utilisé au sein de laboratoires, par des

professionnels formés aux techniques s’y rapportant. 3M n’a pas étudié l’utilisation de ce produit dans des secteurs autres

que l’alimentaire et les boissons. Par exemple, 3M n’a pas étudié ce produit dans le cadre de tests sur des échantillons

environnementaux, pharmaceutiques, cosmétiques, cliniques ou vétérinaires. Le kit de détection moléculaire

2-E. coli O157 3M (incluant H7) n’a pas été évalué en utilisant tous les produits alimentaires, processus de transformation

alimentaire, protocoles de test ou souches bactériennes possibles.

Comme avec toutes les méthodes de test, la source, la formulation et la qualité du milieu d’enrichissement peuvent

inuencer les résultats. Des facteurs tels que les méthodes d’échantillonnage, les protocoles de test, la préparation des

échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoires peuvent également inuencer les résultats. 3M recommande

d’évaluer la méthode, notamment le milieu d’enrichissement, dans l’environnement de l’utilisateur à l’aide d’un nombre

d’échantillons susant et avec des charges alimentaires et microbiennes déterminés pour répondre aux critères de

l’utilisateur.

3M a évalué le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) avec eau peptonée tamponnée ISO.

L’instrument de détection moléculaire 3M™ est conçu pour être utilisé avec des échantillons traités thermiquement

pendant l’étape de lyse de l’analyse, procédé qui détruit les organismes présents dans l’échantillon. Les échantillons

qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent être considérés comme

potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection moléculaire 3M.

3M Sécurité Alimentaire respecte la norme ISO (International Organization for Standardization) 9001 en matière de

conception et de fabrication.

Le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) contient 96tests, décrits dans le tableau1.

Tableau1. Composants du kit de détection moléculaire 3M

Élément Identication Quantité Table des matières Commentaires

Solution de lyse (LS) 3M™

Solution rose

en tubes

transparents

96 (12barrettes

de 8tubes)

580µL de solution de lyse 3M

par tube

Placé sur portoir

et prêt à l’emploi

Tubes de réactifs

pour kit de détection

moléculaire2-E. coli

O157 3M™ (incluant H7)

Tubes roses

96 (12barrettes

de 8tubes)

Mélange spécique lyophilisé

pour l’amplication et la

détection

Prêts à l’emploi

Bouchons supplémentaires Bouchons roses

96 (12barrettes

de 8bouchons)

Prêts à l’emploi

Contrôle de réactif

3M™ (RC)

Tubes

«Flip-Top»

transparents

16 (2poches de

8tubes individuels)

DNA témoin lyophilisé,

mélange pour l’amplication

et la détection

Prêts à l’emploi

Guide de démarrage

rapide

1

Le témoin négatif, non fourni dans le kit, est un milieu d’enrichissement stérile, par exemple BPW ISO. Ne pas utiliser d’eau

comme témoin négatif.

(Français)

2

FR

Sécurité

L’utilisateur doit lire, comprendre et suivre toutes les informations de sécurité mentionnées dans les instructions relatives

au système de détection moléculaire 3M et au kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7). Conserver

ces consignes de sécurité pour référence ultérieure.

AVERTISSEMENT: indique une situation dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner un décès,

des blessures graves et/ou des dommages matériels.

AVIS: indique une situation potentiellement dangereuse qui, si elle n’est pas évitée, pourrait entraîner

des dommages matériels.

W AVERTISSEMENT

Ne pas utiliser le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) pour diagnostiquer des pathologies

chez les humains ou les animaux.

L’utilisateur doit former son personnel aux techniques d’analyse actuelles appropriées, par exemple: les bonnes

pratiques de laboratoire, la norme ISO/IEC17025

(4)

ou la norme ISO7218

(5)

.

An de réduire les risques associés aux faux négatifs, qui peuvent entraîner la diusion de produits contaminés:

• Se conformer au protocole et eectuer les tests en suivant exactement les instructions relatives au produit.

• Utiliser un milieu préchaué à 41,5±1°C. Ne pas laisser le milieu descendre à une température inférieure à la plage

des températures d’incubation lors de la préparation de l'échantillon.

• Conserver le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) conformément aux indications sur

l’emballage et aux instructions relatives au produit.

• Toujours utiliser le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) avant la date de péremption.

• Utiliser le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) avec les échantillons d’aliments, d’aliments

pour animaux et d’environnement de transformation alimentaire qui ont été validés en interne ou par une tierce partie.

• N’utiliser le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) qu’avec des surfaces, des désinfectants,

des protocoles et des souches bactériennes validés en interne ou par une tierce partie.

• En cas d’échantillon environnemental contenant un tampon neutralisant (NB) avec un composé d’aryle sulfonate,

diluer à 1:2 l’échantillon dans un bouillon d’enrichissement stérile avant l’analyse (1volume d’échantillon pour 1volume

de bouillon). Une autre option consiste à transférer 10µL de l’enrichissement du tampon neutralisant dans les tubes

de solution de lyse 3M. Produits pour la manipulation des échantillons 3M™ comprenant un tampon neutralisant

3M™ contenant un complexe d’aryle sulfonate: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, XSLSSL10NB,

HS10NB et HS119510NB.

An de réduire les risques associés à l’exposition aux produits chimiques et aux dangers biologiques:

• Eectuer les analyses bactériologiques dans un laboratoire correctement équipé et sous la supervision de

professionnels qualiés. Les milieux d’enrichissement incubés et les équipements ou les surfaces ayant été en contact

avec des milieux d’enrichissement incubés peuvent contenir des agents pathogènes à des niveaux susamment

élevés pour entraîner des risques pour la santé humaine.

• Toujours respecter les consignes de sécurité courantes du laboratoire, porter des tenues et lunettes de protection

adaptées lors de la manipulation de réactifs et d’échantillons contaminés.

• Éviter tout contact avec le contenu du milieu d’enrichissement et les tubes de réactifs après l’amplication.

• Éliminer les échantillons enrichis et les déchets contaminés associés conformément aux normes locales/régionales/

nationales/du secteur actuelles.

• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chaue.

• Ne pas dépasser le temps de chaue recommandé.

• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérier la température du support de bloc chauant pour système

de détection moléculaire 3M™ (p.ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numérique

et non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support de bloc

chauant pour système de détection moléculaire 3M.

An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse:

• Toujours porter des gants (an de protéger l’utilisateur et de prévenir l’introduction de nucléases).

An de réduire les risques associés à l’exposition à des liquides très chauds:

• Ne pas dépasser le paramètre de température recommandé sur le dispositif de chaue.

• Ne pas dépasser le temps de chaue recommandé.

• Utiliser un thermomètre étalonné adapté pour vérier la température du support de bloc chauant pour système

de détection moléculaire 3M™ (p.ex. thermomètre à immersion partielle ou thermomètre à thermocouple numérique

et non un thermomètre à immersion totale). Le thermomètre doit être placé à l’endroit indiqué du support de bloc

chauant pour système de détection moléculaire 3M.

(Français)

3

FR

AVIS

An de réduire les risques associés à la contamination croisée lors de la préparation de l’analyse:

• Utiliser de préférence des pipettes de qualité biologie moléculaire, stériles et munies d’embouts à ltre.

• Utiliser une nouvelle pipette pour chaque transfert d’échantillon.

• Utiliser les bonnes pratiques de laboratoire pour transférer l’échantillon de l’enrichissement vers le tube de lyse.

Pour éviter toute contamination des pipettes, l’utilisateur peut choisir d’ajouter une étape de transfert intermédiaire.

Par exemple, l’utilisateur peut transférer chaque échantillon enrichi dans un tube stérile.

• Utiliser un poste de travail de biologie moléculaire disposant si possible d’une lampe germicide.

An de réduire les risques associés à un faux positif:

• Ne jamais ouvrir les tubes après amplication.

• Toujours éliminer les tubes contaminés en les faisant tremper dans une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans l’eau)

pendant 1heure. Eectuer cette procédure à distance de la zone de préparation de l’analyse.

Consulter la che de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la réglementation

locale relative à la mise au rebut.

Pour toute question concernant des applications ou procédures spéciques, consulter notre site Internet à l’adresse

www.3M.com/foodsafety ou contacter votre représentant ou distributeur 3M local.

Responsabilité de l’utilisateur

Il incombe aux utilisateurs de prendre connaissance des instructions et des informations relatives au produit. Consulter

notre siteWeb www.3M.com/foodsafety ou contacter le représentant ou distributeur3M local pour obtenir de plus

amples informations.

Lors du choix d’une méthode de test, il est important d’admettre que des facteurs externes comme les méthodes

d’échantillonnage, les protocoles d’analyse, la préparation des échantillons, la manipulation et les techniques de laboratoire

peuvent inuencer les résultats.

Il incombe à l’utilisateur de sélectionner une méthode ou un produit d’analyse adapté pour évaluer un nombre susant

d’échantillons avec les matrices et les souches microbiennes appropriées, an de garantir que la méthode d’analyse est

conforme à ses critères.

Il incombe également à l’utilisateur de déterminer si une méthode d’analyse et ses résultats répondent aux exigences de

ses clients ou fournisseurs.

Comme pour toute méthode d’analyse, les résultats obtenus avec un produit3M Sécurité Alimentaire ne constituent pas

une garantie de la qualité des matrices ou des processus testés.

Dans le but d’aider les clients à évaluer la méthode pour diérentes matrices alimentaires, 3M a élaboré le kit de contrôle

de matrice pour système de détection moléculaire 3M™. Lorsque cela est nécessaire, utiliser le contrôle de matrice

(MC) pour déterminer si la matrice peut avoir un impact sur les résultats du kit de détection moléculaire2-E. coli O157

3M (incluant H7). Tester plusieurs échantillons représentatifs de la matrice, c.-à-d. des échantillons d’origines diérentes,

au cours de toute période de validation lors de l’adoption de la méthode3M ou dans le cadre d’analyses de matrices

nouvelles, inconnues ou ayant subi des modications de matières premières ou de processus.

Une matrice peut être dénie comme un type de produit présentant des propriétés intrinsèques, telles que la composition

et le processus. Les diérences entre les matrices peuvent être aussi simples que les eets causés par leurs diérences

de traitement ou de présentation, par exemple, cru/pasteurisé, frais/sec, etc.

Limitations de garanties/Limites de recours

SAUF SI EXPRESSÉMENT ÉTABLI DANS LA SECTION DE GARANTIE LIMITÉE D’UN EMBALLAGE DE PRODUIT

INDIVIDUEL, 3M RENONCE À TOUTE GARANTIE EXPLICITE ET IMPLICITE, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER,

TOUTE GARANTIE DE COMMERCIALISATION OU D’ADAPTATION POUR UN USAGE SPÉCIFIQUE. En cas de défaut de

tout produit 3M Sécurité Alimentaire, 3M ou son distributeur agréé s’engage, à son entière discrétion, au remplacement

ou au remboursement du prix d’achat du produit. Il s’agit de vos recours exclusifs. Tout défaut supposé du produit

devra être notié à 3M dans un délai de soixante jours et le produit renvoyé au fournisseur. Appeler le Service clientèle

(1-800-328-1671 aux États-Unis) ou votre représentant ociel 3M Sécurité Alimentaire pour obtenir une autorisation

de renvoi.

Limitation de responsabilité de 3M

3M NE SERA PAS TENUE RESPONSABLE DES PERTES OU DES DOMMAGES ÉVENTUELS, QU’ILS SOIENT DIRECTS,

INDIRECTS, SPÉCIFIQUES, ACCIDENTELS OU CONSÉCUTIFS, Y COMPRIS, MAIS SANS S’Y LIMITER, LES PERTES DE

PROFITS. En aucun cas et en aucune manière, la responsabilité de 3M ne sera engagée au-delà du prix d’achat du produit

prétendu défectueux.

(Français)

4

FR

Stockage et mise au rebut

Conserver le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) à une température comprise entre 2 et 8°C.

Ne pas congeler. Conserver à l’abri de la lumière. Une fois le kit ouvert, vérier que le sachet en aluminium est intact.

Si ce sachet est endommagé, ne pas utiliser le kit. Après ouverture, les tubes de réactif non utilisés doivent toujours

être conservés dans le sachet refermable, en laissant l’agent déshydratant à l’intérieur an de maintenir la stabilité des

réactifs lyophilisés. Conserver les poches refermées à une température comprise entre 2 et 8°C. Ne pas conserver plus

de 60jours.

Ne pas utiliser le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) après la date de péremption. La date de

péremption et le numéro de lot sont inscrits sur l’étiquette extérieure de la boîte. Après utilisation, il est possible que les

tubes de milieu d’enrichissement et du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) contiennent des

éléments pathogènes. Lorsque l’analyse est terminée, suivre les normes actuelles du secteur pour l’élimination des déchets

contaminés. Consulter la che de données de sécurité pour obtenir des informations supplémentaires et connaître la

réglementation locale relative à la mise au rebut.

Instructions d’utilisation

Suivre attentivement toutes les instructions. Dans le cas contraire, les résultats obtenus risquent d’être inexacts.

L’utilisateur doit suivre la formation de qualication de l’opérateur du système de détection moléculaire 3M, comme

décrit dans le document intitulé «Protocoles et instructions relatifs à la qualication d’installation (IQ)/qualication

opérationnelle (OQ) pour le système de détection moléculaire 3M»

(7)

.

Décontaminer régulièrement les plans de travail et le matériel du laboratoire (pipettes, outils d’ouverture/de fermeture, etc.)

avec une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans de l’eau) ou avec une solution pour l’élimination du DNA.

Se référer à la section «Instructions spéciques pour méthodes validées» pour connaître les exigences spéciques:

Voir le tableau3 pour les protocoles d’enrichissement selon les Ocial Method of Analysis

SM

de l’AOAC® 2017.01

Voir le tableau 4 pour les protocoles d’enrichissement selon la méthode de certication NF Validation 3M 01/18-05/17

Enrichissement de l’échantillon

Les tableaux2, 3 et 4 fournissent des indications pour les protocoles d’enrichissement des échantillons d’aliments. Il

incombe à l’utilisateur de valider des protocoles d’échantillonnage ou des proportions de dilution diérent(e)s pour garantir

que cette méthode d’analyse est conforme à ses critères.

Aliments

1. Préchauer le milieu d’enrichissement BPWISO à 41,5±1°C.

2. Mélanger de manière aseptique le milieu d’enrichissement et l’échantillon conformément au tableau2, 3 ou 4. Pour tous

les échantillons de viande et à forte teneur en particules, il est recommandé d’utiliser des sacs avec ltre.

3. Homogénéiser soigneusement toutes les matrices, sauf les légumes-feuilles et les fruits, par homogénéisation

mécanique, homogénéisation péristaltique ou mélange manuel pendant 2±0,2minutes. Incuber à 41,5±1°C pendant

la durée appropriée, conformément aux tableaux2, 3 ou 4.

Tableau2. Protocoles d’enrichissement généraux

Matrice de l’échantillon

(a)

Taille de

l’échantillon

Volume du bouillon

d’enrichissement (mL)

Température

d’enrichissement

(±1°C)

Durée

d’enrichissement (h)

Bœuf cru, y compris viande

hachée/hachis et parure

325g

975

BPW ISO

(préchaué)

41,5 10-18

Viandes crues, y compris bœuf,

porc, volaille, agneau et bison cru

25g

225

BPW ISO

(préchaué)

41,5 8-18

Légumes-feuilles

(b)

200g

450

BPW ISO

(préchaué)

41,5 18-24

Autres aliments, y compris fruits

(b)

,

légumes, jus de fruits/légumes,

herbes fraîches, fruits de mer crus,

œufs crus, lait cru, pâte à biscuits et

viandes transformées

25g

225

BPW ISO

(préchaué)

41,5 18-24

(Français)

5

FR

Noix ou mélanges de fruits à coque

contenant des noix (ce protocole

s’applique aux autres fruits à coque,

y compris aux noix de pécan,

amandes, pistaches, noix de cajou et

châtaignes)

25g

225

lait en poudre écrémé

reconstitué

41,5 18-24

(a) Les échantillons congelés doivent être amenés à une température comprise entre 4 et 8°C avant d’être ajoutés au

bouillon d’enrichissement.

(b) Les échantillons de légumes-feuilles et de fruits doivent être agités doucement à la main pendant 5minutes. Ne pas

homogénéiser par action mécanique ou péristaltique.

Instructions spéciques pour méthodes validées





de l’AOAC® 2017.01

Dans le programme Ocial Method of Analysis

SM

de l’AOAC, le kit de détection moléculaire E. coli O157 3M (incluant H7)

s’est révélé être une méthode ecace pour la détection de E. coli O157:H7. Les matrices testées au cours de l’étude sont

répertoriées dans le tableau3.

Tableau3. Protocoles d’enrichissement utilisant une BPW ISO préchauée à une température de 41,5±1°C selon les

Ocial Methods

SM

de AOAC

®

2017.01

Matrice de l’échantillon

Taille de

l’échantillon

Volume du bouillon

d’enrichissement (mL)

Durée

d’enrichissement (h)

Homogénéisé

Viande hachée

de bœuf crue

(73% de viande maigre)

325g 975 10-18

Manuellement ou par

action péristaltique

Épinards crus en sachet

(a)

200g

450

18-24

Agité doucement à la

main pendant 5minutes,

ne pas homogénéiser

Choux de Bruxelles frais 25g

225

18-24

Agité doucement à la

main pendant 5minutes,

ne pas homogénéiser

Myrtilles surgelées

(a)(b)

25g 225 18-24

Agité doucement à la

main pendant 5minutes,

ne pas homogénéiser

(a) Les échantillons de légumes-feuilles et de fruits doivent être agités doucement à la main pendant 5minutes. Ne pas

homogénéiser par action mécanique ou péristaltique.

(b) Les échantillons congelés doivent être amenés à une température comprise entre 4 et 8°C avant d’être ajoutés au

bouillon d’enrichissement.

Méthode certiée par AFNOR Certication

3M 01/18-05/17

MÉTHODES ALTERNATIVES D’ANALYSE POUR L’AGROALIMENTAIRE

http://nf-validation.afnor.org/en

Pour plus d’information sur l’expiration de la validité, se reporter au certicat NF VALIDATION disponible sur le site Internet

cité ci-dessus.

Méthode de certication NF VALIDATION, conformément à la norme ISO16140-2

(8)

par rapport à la norme ISO16654

(3)

Portée de la validation: viande de bœuf crue, produits laitiers au lait cru, fruits et légumes crus

Préparation de l’échantillon: les échantillons doivent être préparés conformément aux normes ENISO16654 et

ENISO6887

(6)

Version de logiciel: voir le certicat

(Français)

6

FR

Tableau4. Protocoles d’enrichissement utilisant une BPW ISO préchauée à une température de 41,5±1°C selon

la méthode de certication NF VALIDATION 3M 01/18-05/17

Protocole

Taille de

l’échantillon

Volume du bouillon

d’enrichissement (mL)

Température

d’enrichissement (±1°C)

Durée

d’enrichissement (h)

Produits laitiers au lait cru,

fruits crus et légumes crus

25g 225 41,5 18-24

Viande de bœuf crue 25g 225 41,5 8-24

REMARQUES:

• Les échantillons supérieurs à 25g n’ont pas été analysés dans le cadre de l’étude NF VALIDATION.

• Les points d’interruption du protocole recommandés se situent après l’enrichissement ou après la lyse de l’échantillon.

Le bouillon d’enrichissement ou le lysat de l’échantillon peut être conservé à une température comprise entre

2 et 8°C pendant une durée maximale de 72heures. Après avoir retiré le bouillon d’enrichissement de son lieu de

conservation, reprendre l’analyse à partir de l’étape1 de la section Lyse. Après avoir retiré le lysat de l’échantillon

de son lieu de conservation, reprendre l’analyse à partir de l’étape7 de la section Lyse. Le lysat peut également être

conservé à -20°C.

• Les protocoles d’enrichissement courts sont sensibles aux conditions d’incubation et les températures spéciées

dans le protocole doivent être respectées. La température du bain-marie ou de l’incubateur où les bouillons sont

préchaués doit être contrôlée pour s’assurer que le bouillon d’enrichissement atteigne la température requise. La

durée totale nécessaire pour la préparation de l’échantillon, y compris le délai entre la n de l’étape de préchauage

du milieu et le début de l’incubation de l’échantillon alimentaire, ne doit pas dépasser 45minutes. Il est recommandé

d’utiliser un incubateur ventilé durant l’incubation.

Préparation du plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M™

1. Humidier un chion ou une serviette jetable à l’aide d’une solution de 1-5% d’eau de Javel (v:v dans de l’eau) et

nettoyer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M.

2. Rincer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M à l’eau.

3. Utiliser un chion jetable pour sécher le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M.

4. S’assurer que le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M est sec avant

toute utilisation.

Préparation du support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M™

Poser le support de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M sur le plan de travail du laboratoire:

le plateau de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M n’est pas utilisé. Utiliser le bloc refroidissant

à la température ambiante du laboratoire (20 et 25°C).

Préparation du support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M™

Placer le support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M dans une unité de traitement thermique

à sec double bloc. Allumer l’unité de traitement thermique à sec et régler la température an que le support de bloc

chauant pour système de détection moléculaire 3M atteigne et conserve une température de 100±1°C.

REMARQUE: selon l’unité de traitement thermique utilisée, le support de bloc chauant pour système de détection

moléculaire 3M atteint la température souhaitée en 30minutes environ. Utiliser un thermomètre étalonné adapté

(p.ex., un thermomètre à immersion partielle ou un thermomètre à thermocouple numérique, et non un thermomètre à

immersion totale) placé à l’endroit indiqué du support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M an

de vérier que sa température est de 100±1°C.

Préparation de l’instrument de détection moléculaire 3M™

1. Lancer le logiciel de détection moléculaire 3M™ et ouvrir une session. Contacter votre représentant 3M Sécurité

Alimentaire pour vous assurer d’avoir la version la plus récente du logiciel.

2. Mettre l’instrument de détection moléculaire 3M sous tension.

3. Créer ou modier une analyse en saisissant les données pour chaque échantillon. Pour plus de précisions, consulter

le manuel d’utilisation du système de détection moléculaire 3M™.

REMARQUE: l’instrument de détection moléculaire 3M doit atteindre et maintenir la température de 60°C avant

l’insertion du plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M, dans lequel sont placés les tubes

de réactifs. Cette étape de chauage prend environ 20minutes; pendant ce processus, un voyant lumineux ORANGE

s’allume sur la barre d’état de l’instrument. Lorsque l’instrument est prêt pour l’analyse, la barre d’état passe au VERT.

(Français)

7

FR

Lyse

1. Laisser les tubes de solution de lyse 3M se réchauer en plaçant le support à température ambiante (20 et 25°C)

pendant une nuit (16 à 18heures). Il est également possible d’amener les tubes de solution de lyse 3M à température

ambiante en les plaçant sur le plan de travail du laboratoire pendant au moins 2heures, en incubant les tubes de

solution de lyse 3M dans un incubateur à 37±1°C pendant 1heure ou en les plaçant dans une unité de traitement

thermique à sec double bloc pendant 30secondes à 100°C.

2. Retourner les tubes recouverts d’un bouchon pour les mélanger. Passer à l’étape suivante dans un délai de 4heures.

3. Retirer le bouillon d’enrichissement de l’incubateur.

4. Un tube de solution de lyse 3M est nécessaire pour chaque échantillon et pour le témoin négatif (NC)

(milieu d’enrichissement stérile).

4.1 Les barrettes de tubes de solution de lyse 3M peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes de

solution de lyse 3M souhaité. Sélectionner le nombre de tubes de solution de lyse 3M ou de barrettes de 8tubes

nécessaire. Placer les tubes de solution de lyse 3M dans un portoir vide.

4.2 Pour éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de solution de lyse 3M à la fois et utiliser

un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.

4.3 Transférer l’échantillon enrichi dans les tubes de solution de lyse 3M comme indiqué ci-dessous:

Transférer tout d’abord chaque échantillon enrichi dans des tubes de solution de lyse 3M individuels.

Transférer le NC en dernier.

4.4 Ouvrir les barrettes de tubes de solution de lyse 3M une à une à l’aide de l’outil d’ouverture/fermeture pour

système de détection moléculaire 3M™-Lyse.

4.5 Jeter le bouchon du tube de solution de lyse 3M. Si le lysat doit être soumis à un nouveau test, placer les bouchons

dans un récipient propre pour réapplication après la lyse.

4.5.1 Pour le traitement du lysat conservé, voir l’annexeA.

4.6 Transférer 20µl d’échantillon dans un tube de solution de lyse 3M, sauf indication contraire mentionnée dans

les tableaux de protocole2, 3 et 4.

20 µl

5. Répéter l’étape4.3 jusqu’à ce que chaque échantillon individuel soit ajouté à un tube de solution de lyse

3M correspondant sur la barrette.

6. Répéter les étapes 4.1 à 4.6 en fonction des besoins pour tous les échantillons à analyser.

7. Une fois tous les échantillons transférés, transférer 20µL de NC (milieu d’enrichissement stérile, p.ex. BPWISO) dans

un tube de solution de lyse 3M. Ne pas utiliser d’eau comme NC.

8. Vérier que la température du support de bloc chauant pour système de détection moléculaire 3M est de 100± 1°C.

9. Placer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse 3M dans le support de bloc chauant pour système de

détection moléculaire 3M et chauer pendant 15±1minutes.

Lors du chauage, la solution de lyse 3M passera de rose

(froide) à jaune (chaude).

Les échantillons qui n’ont pas été soumis à un traitement thermique adéquat pendant l’étape de lyse peuvent

être considérés comme potentiellement dangereux et ne doivent PAS être insérés dans l’instrument de détection

moléculaire 3M.

10. Retirer le portoir non couvert de tubes de solution de lyse 3M du bloc chauant et laisser refroidir dans le support de

bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M pendant une durée comprise entre 5 et 10minutes. Utilisé

à température ambiante sans le plateau de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M, le support

de bloc refroidissant pour système de détection moléculaire 3M doit être posé directement sur le plan de travail du

laboratoire. Une fois froide, la solution de lyse retrouvera une couleur rose.

(Français)

8

FR

11. Retirer le couvercle des tubes de solution de lyse 3M du support de bloc refroidissant pour système de détection

moléculaire 3M.

00:15:00

99-101ºC

20-25ºC

00:05:00

Amplication

1. Il est nécessaire d’utiliser un tube de réactif du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) pour

chaque échantillon et pour le NC.

1.1 Les barrettes de tubes peuvent être coupées de manière à obtenir le nombre de tubes souhaité. Sélectionner le

nombre de tubes individuels de réactifs du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) ou de

barrettes de 8tubes nécessaire.

1.2 Placer les tubes de réactifs du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) dans un portoir vide.

1.3 Éviter d’agiter les pastilles réactives se trouvant au fond des tubes.

2. Sélectionner un tube de contrôle de réactif 3M et le placer dans le portoir.

3. An d’éviter toute contamination croisée, ouvrir une barrette de tubes de réactifs du kit de détection moléculaire2-E.

coli O157 3M (incluant H7) à la fois et utiliser un nouvel embout de pipette pour chaque étape de transfert.

4. Transférer le lysat dans un tube de réactif du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) et dans

un tube de contrôle de réactif 3M comme décrit ci-dessous:

Transférer d’abord chaque lysat d’échantillon dans un tube de réactif du kit de détection moléculaire2-E. coli O157

3M (incluant H7), puis faire de même avec le NC. Hydrater le tube de contrôle de réactif 3M en dernier.

5. Ouvrir le tube de réactif du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) à l’aide de l’outil

d’ouverture/fermeture pour système de détection moléculaire 3M™-Réactif, en procédant une barrette de tubes après

l’autre. Jeter le bouchon.

5.1 Transférer 20L de lysat d’échantillon prélevé au niveau de la moitié (½) supérieure du liquide (éviter

le précipité) dans le tube de solution de lyse 3M vers le tube de réactif correspondant du kit de détection

moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7). Incliner la pipette pour ne pas agiter les pastilles. Mélanger

en eectuant 5cycles d’aspiration/ de refoulement avec la pipette.

5.2 Répéter l’étape5.1 jusqu’à ce que chaque lysat d’échantillon individuel ait été ajouté au tube de réactif

correspondant du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) sur la barrette.

5.3 Placer les bouchons supplémentaires prévus à cet eet sur les tubes de réactif du kit de détection

moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7), puis prendre le bord arrondi de l’outil d’ouverture/fermeture pour

système de détection moléculaire 3M-Réactif et appuyer dans un mouvement de va-et-vient an de s’assurer

que le bouchon est parfaitement en place.

5.4 Répéter les étapes 5.1 à 5.3 pour tous les échantillons à analyser.

5.5 Lorsque tous les lysats d’échantillons ont été transférés, répéter les étapes5.1 à 5.3 an de transférer 20µL de lysat

de NC dans un tube de réactif du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7).

5.6 Transférer 20µL de lysat de NC dans un tube de contrôle de réactif 3M. Incliner la pipette pour ne pas agiter

les pastilles. Mélanger en eectuant 5cycles d’aspiration/ de refoulement avec la pipette.

(Français)

9

FR

6. Charger les tubes recouverts d’un bouchon dans un plateau de chargement rapide pour système de détection

moléculaire 3M propre et décontaminé. Fermer et verrouiller ensuite le couvercle.

20 µL

7. Examiner et conrmer l’analyse congurée sur le logiciel de détection moléculaire 3M.

8. Cliquer sur l’icône «Démarrer» du logiciel et sélectionner l’instrument à utiliser. Le couvercle de l’appareil sélectionné

s’ouvre automatiquement.

9. Placer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire 3M dans l’instrument de détection

moléculaire 3M et fermer le couvercle pour lancer l’analyse. Les résultats sont obtenus en 60minutes; toutefois,

les résultats positifs peuvent être détectés plus tôt.

10. Une fois l’analyse terminée, retirer le plateau de chargement rapide pour système de détection moléculaire

3M de l’instrument de détection moléculaire 3M et tremper les tubes dans une solution d’eau de Javel à

1-5% (v:v dans de l’eau) pendant 1heure, et ce, à l’écart de la zone de préparation des analyses.

AVIS: pour réduire le risque de résultats faux positifs dus à une contamination croisée, ne jamais ouvrir les tubes

de réactif contenant du DNA amplié. Cela s’applique au contrôle de réactif 3M, au tube de réactif du kit de

détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) et aux tubes de contrôle de matrice 3M. Toujours éliminer

les tubes de réactif fermés en les trempant dans une solution d’eau de Javel à 1-5% (v:v dans de l’eau) pendant

1heure, et ce à l’écart de la zone de préparation des analyses.

Résultats et interprétation

Un algorithme interprète le signal lumineux et la courbe de résultats provenant de la détection de l’amplication de l’acide

nucléique. Les résultats sont automatiquement analysés par le logiciel et sont codés par couleur en fonction du résultat.

Un résultat positif ou négatif est déterminé par l’analyse d’un nombre de paramètres des courbes individuelles. Les

résultats présumés positifs sont rapportés en temps réel, tandis que les résultats négatifs ou à vérier sont achés à la n

de l’analyse.

Les résultats présumés positifs doivent être conrmés selon les procédures standard des laboratoires ou en suivant la

conrmation de la méthode de référence appropriée

(1,2,3)

, en commençant par eectuer un transfert du premier bouillon

d’enrichissement BPWISO vers le ou les bouillons d’enrichissement secondaires, puis en eectuant la mise en culture et

la conrmation des isolats à l’aide des méthodes biochimiques et sérologiques appropriées.

REMARQUE: même un échantillon négatif ne donnera pas de résultat égal à zéro, car le système et les réactifs

d’amplication du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) eectuent une lecture d’unité relative

de lumière (RLU) «de base».

Dans le cas peu probable d’un résultat lumineux inhabituel, l’algorithme considérera l’échantillon comme «À vérier».

3M recommande à l’utilisateur de recommencer l’analyse pour tout échantillon considéré comme «À vérier». Si le

résultat continue à être «À vérier», passer au test de conrmation en utilisant la méthode de votre choix ou en utilisant

une méthode conforme aux règlementations locales.

En cas de résultats contradictoires (positif présumé avec le kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7),

non conrmé par l’un des moyens décrits ci-dessus, et en particulier pour le test d’agglutination au latex), le laboratoire

doit suivre les procédures nécessaires pour garantir la validité des résultats obtenus.

Conrmation des résultats selon la méthode de certication NF VALIDATION

Dans le cadre de la NF VALIDATION, tous les échantillons identiés comme positifs par le kit de détection

moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) doivent être conrmés par l’un des tests suivants:

Option1: utilisation de la norme ISO16654

(3)

en commençant par l’enrichissement en eau peptonée tamponnée

(3)

.

Option2: mise en place d’une méthode de conrmation consistant à eectuer les étapes suivantes: étaler en stries

50L d’enrichissement en eau peptonée tamponnée

(3)

sur une boîte de gélose MacConkey Sorbitol au céxime et

tellurite de potassium (CT-SMAC)

(3)

. Incuber pendant 24±3heures à 37°C. Étaler en stries les colonies caractéristiques

sur de la gélose nutritive et eectuer un test d’agglutination au latex directement sur les colonies isolées. Si les résultats

du kit de détection moléculaire2-E. coli O157 3M (incluant H7) ne sont pas conrmés, eectuer une séparation

immunomagnétique, puis étaler en stries 50L sur la gélose CT-SMAC.

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3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) MDA2ECO96, 96 tests, 1 ea Instruções de operação

3M Molecular Detection Assay 2 - E. coli O157 (including H7) MDA2ECO96, 96 tests, 1 ea Instruções de operação

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