3M Microbial Luminescence System MLSII, 1 ea Instruções de operação

3Microbial Luminescence System (MLS)

MLS-USB Instrument User Guide

3Microbial Luminescence System (MLS)

Manuel d’instructions de l’appareil MLS-USB Instrument

Sistema de luminiscencia pra detección microbiana 3M (MLS)

Guía de usuario del aparato MLS-USB

Sistema de Luminescência Microbiana (MLS) 3

Manual do usuário do instrumento MLS-USB

3 微生物ルミネセンスシステム（MLS）

MLS-USB装置ユーザーガイド

3 微生物发光系统（MLS）

MLS-USB仪器使用者指南

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Portuguese (Português)

SUMÁRIO

1 INFORMAÇÕES IMPORTANTES 44

1.1 Uso previsto 44

1.2 Responsabilidade do usuário 44

1.3 Informações de segurança 44

1.4 Condições operacionais ambientais 44

1.5 Informações da FCC 45

1.6 Conteúdo da embalagem 45

1.7 Itens fornecidos pelo usuário 45

2 VISÃO GERAL DA LUMINESCÊNCIA 46

2.1 Bioluminescência e o Sistema de Luminescência Microbiana (MLS) 3M 46

3 DESEMBALANDO O INSTRUMENTO MLS-USB 47

4 PREPARANDO O INSTRUMENTO PARA O USO INICIAL 48

5 PREPARANDO O INSTRUMENTO MLS-USB PARA TESTAR AS AMOSTRAS 49

5.1 Lavando os injetores 49

5.2 Iniciando os injetores 49

6 PREPARO DOS REAGENTES MLS PARA A VERIFICAÇÃO DE REAGENTE CONTROLE E ENSAIO UHT 49

6.1 Orientações gerais para reagentes MLS: 49

6.2 Preparando os reagentes 50

7 ENSAIO DE VERIFICAÇÃO DE REAGENTE CONTROLE 50

7.1 Preparando o ATP controle 51

7.2 Preparo dos instrumentos 51

7.3 Instruções para a veriﬁcação de reagente controle 51

7.4 Interpretação dos resultados 51

7.5 Dicas de solução de problemas 52

8 TESTES DE ESTERILIDADE DE PRODUTOS LÁCTEOS UHT 52

8.1 Preparo das amostras para teste 52

8.2 Preparo do ensaio 52

8.3 INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS: 53

9 LIMPANDO O INSTRUMENTO APÓS OS TESTES 53

10 DESLIGANDO O SISTEMA 53

11 LIMPEZA DE MANUTENÇÃO 54

12 MOVENDO O INSTRUMENTO MLS-USB PARA OUTRA BANCADA 54

APÊNDICE I CÁLCULOS DE USO DE REAGENTES * 55

APÊNDICE II VERIFICAÇÃO DE REAGENTE CONTROLE – VISÃO GERAL DE SOLUÇÃO DE PROBLEMAS 56

44

1. INFORMAÇÕES IMPORTANTES

Por favor leia, compreenda e siga todas as informações de segurança contidas nestas instruções e no manual do operador do fabricante antes de

usar o Sistema de Luminescência Microbiana 3M™ (instrumento MLS-USB). Conserve estas instruções para referência futura.

1.1 Uso Previsto

O MLS-USB 3M é um luminômetro de microplaca projetado para detecção microbiana. Entre em contato com seu representante oﬁcial da 3M

Microbiologia para uma lista atual de reagentes MLS 3M destinados ao uso com instrumentos MLS 3M. A 3M não projetou nem aprovou este

instrumento para uso com produtos de outros fabricantes. A unidade foi projetada e testada somente para ser usada com o cabo de alimentação

de energia fornecido com o instrumento. Somente técnicos adequadamente treinados devem operar o instrumento MLS-USB 3M.

1.2 Responsabilidade Do Usuário

Ao selecionar um método de teste, é importante reconhecer que fatores externos, tais como métodos de amostragem, protocolos de teste,

preparo de amostras, manuseio e técnicas laboratoriais podem inﬂuenciar nos resultados.

É responsabilidade do usuário, quando selecionar qualquer método de teste, avaliar um número suﬁciente de amostras com as matrizes e

desaﬁos microbianos que permita assegurar que o método escolhido satisfaça os critérios por ele estabelecidos.

Também é responsabilidade do usuário determinar se o método de teste e resultados obtidos satisfazem as exigências de seus clientes e

fornecedores.

Como ocorre com qualquer método de teste, os resultados obtidos através do uso deste produto não constituem garantia da qualidade das

matrizes ou processos testados.

1.3 Informações De Segurança

Explicação dos símbolos:

ATENÇÃO

Consulte o manual do operador

ALERTA

Para reduzir o risco associado a tensão elétrica perigosa que, se não for evitada, poderá resultar em morte ou ferimentos

graves:

•Inspecioneperiodicamenteocabodealimentaçãodeenergiacomrelaçãoadanos.

Substitua todos os componentes daniﬁcados.

•Substituaumcabodealimentaçãodeenergiadanicadoexclusivamenteporumcabodealimentaçãodesignadopela3M.

CUIDADO

Para reduzir o risco associado a contaminação ambiental que, se não for evitada, poderá resultar em ferimentos leves ou

moderados:

•Sigaasnormasfederais,estaduaiselocaisquandodescartarcomponenteselétricos,inclusiveafontedealimentaçãode

energia em linha.

•Esteaparelhoincorporapeçasecomponentesquecontêmchumbo.Eledeveserdescartadodeacordocomasnormase

exigências locais referentes a dispositivos elétricos e eletrônicos desta natureza.

Em atendimento à Diretiva Européia 2002/96/EC do Parlamento Europeu e do Conselho, de 27 de Janeiro de 2003, sobre resíduos

elétricos e eletrônicos (WEEE - waste electrical and electronic equipment), este produto não pode ser descartado no sistema de

coleta de lixo comum municipal. Ao invés disto, este aparelho deve ser coletado separadamente, de acordo com as normas euro-

péiaslocais.Abarrasólidautilizadaemconjuntocomalixeiracomrodinhascomum"X"riscadosobreelaindicaqueoproduto

foi colocado no mercado após 13 de agosto de 2005. Este símbolo é aplicável apenas na Europa.

45

1.4 Condições Operacionais Ambientais

Condição ambiental Condição operacional Unidades

Altitude Não limitado metros

Temperatura de exaustão normal Não se aplica °C

Temperatura de exaustão máxima Não se aplica °C

Umidade relativa 37% sem condensação %

Voltagem 50 AN (EUA/Canadá) 120 volts CA

Voltagem 50 AE (Europa) 240 volts CA

Voltagem 50 AJ (Japão) 100 volts CA

Freqüência 50-60 Hertz

Grau de poluição Emissões Classe A (Emissões de correntes harmônicas e

tremulações/ﬂutuações de voltagem: Classe B)

1.5 Informações Da Fcc

NOTA: Este equipamento foi testado e obedece aos limites estabelecidos para dispositivos digitais Classe A, conforme a Parte 15 das Normas da

FCC. Esses limites foram estabelecidos para fornecer uma proteção razoável contra interferências nocivas quando o equipamento é operado em

um ambiente comercial. Este equipamento gera, usa e pode irradiar energia de radiofreqüência e, se não for instalado e usado de acordo com o

manual de instalação e uso, pode causar interferências nocivas às radiocomunicações. A operação deste equipamento em uma área residencial

pode causar interferências prejudiciais, neste caso, o usuário deverá corrigir a interferência por sua própria conta.

1.6 Conteúdo Da Embalagem

• InstrumentoMLS-USB3M

• AcessóriosexigidospeloMLS

o Cabo de alimentação de energia do instrumento

o Cabo USB

o Seringas (3)

o Injetores (3)

o Kitdetubulação(para3injetores)

o Placa de drenagem

• ManualdousuáriodoinstrumentoMLS-USB3M

• ManualdooperadordoluminômetroMLXdofabricante

• SoftwareRevelation™emCD

• Folhadeinstruçõesdeaberturadaembalagemdoinstrumento

1.7 Itens Fornecidos Pelo Usuário

• Computador,conectadoatravésdeumaportaUSB

√ Requisitos mínimos: PC baseado em Windows, Pentium 500 MHz ou superior, Unidade de CD-ROM, ≥100 MB de espaço livre em disco,

64 MB RAM (128recomendados),Microsoft®Windows2000ouWindowsXP

• Monitordocomputador(placagrácaemcoresSVGAemonitorcoloridocompatível)

• Mouse

• Teclado

• Impressora(opcional;compatívelcomWindows2000ouXP)

46

• Pipetadorescapazesdeaplicar50-1000µL

• Ponteiras

• Incubadora

2. VISÃO GERAL DA LUMINESCÊNCIA

A adenosina trifosfato (ATP) é a molécula básica de energia de todos os organismos vivos. Ela está presente nas células de todos os animais,

vegetais e micróbios. ‘O termo célula somática é normalmente usado para células de animais e vegetais (não microbianas). O ATP também pode

estar presente em materiais de origem orgânica como ATP ‘livre’ (fora das células), quando células são rompidas durante processos naturais ou

de fabricação, tal como a homogeneização e o tratamento térmico.

O termo bioluminescência é usado para descrever uma reação que produz luz por meio de um processo biológico. Na presença do ATP, uma

enzima chamada luciferase, juntamente com seu substrato, a luciferina D (chamadas coletivamente de L/L1 neste documento), provocam uma

reação bioquímica que produz luz como um dos produtos ﬁnais. A quantidade de luz emitida é proporcional à quantidade de ATP presente.

Baixos níveis de luz podem ser detectados e medidos usando-se um luminômetro sensível.

Reação de bioluminescência:

luciferase

O

2

+luciferina + Mg

++

+ ATP oxiluciferina + CO

2

+ AMP + PPi + luz

2.1 Bioluminescência E O Sistema De Luminescência Microbiana (MLS 3M)

A plataforma MLS 3M utiliza a bioluminescência do ATP para detectar contaminação microbiana em produtos UHT (Temperatura Ultra-Alta) ou

produtos com prazo de validade estendido (ESL). Para se obter resultados conﬁáveis de detecção microbiana nesses produtos, eles precisam ser

incubados antes dos testes, permitindo o crescimento microbiano até um nível detectável. Redução substancial do ATP somático e livre também

é crítica para permitir a detecção precisa de ATP microbiano (contaminante). Isso é feito usando-se uma enzima que degrada o ATP, chamada de

ATPase.

Como a quantidade de luz emitida é diretamente proporcional à quantidade de ATP presente, a reação de bioluminescência ajuda a determinar

o grau de contaminação de um produto em teste. Se nenhum micróbio estiver presente, pouco ou nenhum ATP detectável restará após o

tratamento com ATPase. ‘Quando L/L1 é adicionada, o sinal será baixo ou não detectável e, assim, dentro do limite de aprovação.

Resumo de um ensaio de teste MLS 3M:

Até 96 amostras podem ser carregadas em uma placa de ensaios. O tempo e a adição dos reagentes são controlados pelo instrumento MLS-

USB. Passo 1: A ATPase é adicionada a cada poço de teste, para degradar ATP somático e livre, seguida por uma incubação de 15 minutos.

Passo 2: Um extratante é adicionado a cada poço de teste, para romper as células microbianas intactas e liberar o ATP microbiano. Passo 3: O

reagente L/L1 é adicionado ao poço de teste, criando uma reação que emite luz entre o L/L1 e o ATP microbiano. O instrumento MLS-USB lê o

nível de luz emitida de cada amostra em teste e expressa o resultado em RLUs (Unidades Relativas de Luz). A ﬁgura 1 ilustra os passos de um

ensaio usando o MLS 3M.

Os resultados ﬁcam prontos em 40 minutos ou menos (dependendo do número de amostras em teste), comparados aos 2 - 5 dias necessários

quando se usa métodos microbiológicos tradicionais.

Critérios padrão de aprovação/reprovação estão estabelecidos, mas esses critérios dependem do tipo de produto e das exigências do usuário.

Critérios de aprovação/reprovação apropriados são inicialmente estabelecidos para cada tipo de produto, testando-se múltiplas amostras contra

métodos padronizados existentes.

Figura 1. Adição de ATPase, extratante e L/L1 a uma amostra de leite contaminado

Micróbio

Adição de

ATPase 15

minutos

ATP

Adição de

extratante

Adição de

L/L1

47

3. DESEMBALANDO O INSTRUMENTO MLS-USB

É importante iniciar o processo de instalação após ter decidido onde vai colocar o instrumento MLS-USB. O instrumento tem aproximadamente

91 cm (36 pol.) de largura, 61 cm (24 pol.) de altura e 41 cm (16 pol.) de profundidade.

1. Assegure-se de que o local do instrumento permita fácil acesso a uma tomada da rede de energia elétrica e também permita que o

transportador de placas abra sem obstruções.

2. Um espaço de pelo menos 6 polegadas (15 cm) deve ser deixado de todos os lados, para permitir ventilação e impedir que o instrumento

superaqueça.

3. Para desembalar o instrumento, remova a espuma de embalagem da parte superior da caixa de transporte. CUIDADO: O instrumento MLS-

USB pesa mais de 22 kg (50 lb.). Duas pessoas podem ser necessárias para levantar o instrumento da caixa de transporte.

4. Remova o embrulho plástico externo do sistema.

5. Abra manualmente a porta inferior do sistema. IMPORTANTE: Evite abrir a porta do transportador de placas mais de 90 graus (posição

horizontal), já que isso pode daniﬁcar permanentemente a porta, potencialmente criando um vazamento de luz. Consulte a folha de

instruções de abertura da embalagem do instrumento, incluída na caixa de transporte do instrumento.

6. Três blocos de espuma prendem o transportador de placas ao sistema. Os blocos de espuma estão posicionados conforme mostrado na

ﬁgura 2.

7. Puxe o bloco de espuma central, da frente do compartimento transportador de placas.

8. Busque o lado esquerdo do compartimento transportador de placas. Pegue o bloco de espuma esquerdo e remova-o.

9. Busque o compartimento transportador de placas. Pegue o transportador de placas e mova-o manualmente para a esquerda.

10. Busque o lado direito do compartimento transportador de placas. Pegue o bloco de espuma direito e remova-o. NÃO DESCARTE OS BLOCOS

DE ESPUMA.

11. Desembale o instrumento, de acordo com a folha de instruções de abertura de embalagem do instrumento.

12. Consulte o manual do operador do fabricante para detalhes e ilustrações adicionais.

Figura 2. Inserção dos blocos de espuma ao redor do transportador de placas (vista superior).

Instalando o software Revelation™

Não conecte ainda o cabo USB ao instrumento! Os drivers USB serão instalados durante a instalação do software Revelation.

1. Ligue o computador (PC).

2. Espere o Microsoft Windows iniciar.

3. ColoqueoCDdeinstalação.OsoftwareInstallShieldWizardforRevelationMLXiniciarásuaexecuçãoautomaticamente.

4. Clique em Next (Avançar) e siga as instruções do Wizard. Quando a instalação estiver concluída, clique em Finish (Concluir) e remova o CD

de instalação do PC.

5. Acesse o software Revelation a partir dos programas do Windows: Dynex Technologies > Revelation MLX > Revelation MLX.

Software Dynex Revelation. O usuário ﬁnal tem ciência e concorda que o software Dynex Revelation™ não é um produto da 3M e está sendo

fornecidoparaousuárionalparaconveniênciadomesmo,semcustos,daformaquevem.A3MNÃODÁQUAISQUERGARANTIAS,EXPRESSAS

OU IMPLÍCITAS, INCLUSIVE GARANTIAS DE COMERCIALIZAÇÃO E ADEQUAÇÃO A UM PROPÓSITO ESPECÍFICO, COM RELAÇÃO AO SOFTWARE

DYNEXREVELATION™.ANÃOSERQUEESTEJAPROIBIDOPORLEI.A3MNÃOSERÁRESPONSÁVELPORQUAISQUERPERDASOUDANOSSEJAM

DIRETOS, INDIRETOS, ESPECIAIS, FORTUITOS OU SUBSEQÜENTES, BASEADO EM QUEBRA DE GARANTIA, QUEBRA DE CONTRATO, NEGLIGÊNCIA,

RESPONSABILIDADE ESTRITA EM DANOS CIVIS OU QUALQUER OUTRA SITUAÇÃO JURÍDICA, MESMO SE A 3M TIVER SIDO ALERTADA DA

POSSIBILIDADE DE TAIS DANOS, INCLUSIVE, MAS NÃO LIMITADOS A, LUCROS CESSANTES, PERDA DE LUCROS, EQUIPAMENTOS, USO, DADOS OU

INFORMAÇÕES DE QUALQUER TIPO.

Transportador

de places

Bloco de espuma

central (Remova)

Porta inferior

Guarde para

uso future

48

Conectando o computador

1. Localize o cabo USB.

2. Conecte uma extremidade do cabo na porta USB existente na parte de trás do instrumento MLS.

3. Conecte a outra extremidade do cabo em uma porta USB do computador.

Conectando o cabo de alimentação de energia

CUIDADO! O instrumento MLS-USB precisa ser conectado a uma tomada da rede elétrica que seja adequadamente aterrada. Consulte um

eletricista qualiﬁcado para veriﬁcar se as tomadas da rede de energia estão aterradas corretamente.

1. Localize o cabo de alimentação de energia do instrumento MLS-USB.

2. Conecte o cabo de alimentação de energia à parte de trás do instrumento.

3. Conecte o instrumento MLS-USB a uma tomada da rede elétrica aterrada.

4. PREPARANDO O INSTRUMENTO PARA O USO INICIAL

NOTA: É importante que as orientações de segurança do laboratório sejam seguidas quando se usa qualquer produto químico ou reagente

associado ao instrumento MLS-USB.

1. Ligue o instrumento no interruptor liga/desliga, no canto inferior direito da parte frontal do instrumento.

2. Ligue o PC.

3. Aparecerá uma tela de login. Pressione a tecla ENTER, deixando o campo Password em branco (a conﬁguração padrão do programa é não

usar proteção por senha, mas isso pode ser alterado pelo usuário).

4. Oinstrumentoefetuaráautomaticamenteumautotestedeseuscomponentescríticos(eixoX-Y,tubodofotomultiplicador-PMT,etc.).

5. Depois que o autoteste é concluído, coloque cuidadosamente 3 frascos de água livre de ATP na prateleira de frascos (parte superior direita do

instrumento).

6. Insira a placa de drenagem (cód. 3912) no transportador de placas, de forma que o ponto verde ﬁque no canto superior direito do

transportador (mais perto do instrumento). Feche a porta do transportador de placas.

7. Encha 3 frascos âmbar com água livre de ATP (do kit cód. 3005). Coloque os frascos nos suportes de frascos do instrumento MLS.

8. Selecione Utilities no menu principal e então Dispensers no menu da barra de rolagem. Clique em Initialize para iniciar as seringas.

9. Uma vez que as seringas estejam iniciadas, clique em Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e então selecione 20

bombadas (strokes). Insira a placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK, para enxaguar os injetores.

NOTA: Durante o processo de lavagem/limpeza, o ﬂuido passa pelos injetores e tubos de reagente e, então na placa de drenagem. O

instrumento não permite que o processo de lavagem/limpeza comece, a não ser que a placa de drenagem seja detectada no transportador

de placas.

10. Observe o movimento do ﬂuido dentro das seringas durante a operação inicial. É normal que exista ar nas linhas de reagentes durante

as primeiras 1 ou 2 aspirações, mas ele deve desaparecer rapidamente após ﬂuido ser injetado nas linhas. Se forem observadas bolhas

durante o processo de lavagem/limpeza, elas podem indicar uma perda de vedação na seringa ou uma perda de conexão entre as linhas de

reagentes e a válvula, ou com a sonda do injetor.

11. Quando o processo de lavagem/limpeza estiver concluído e o transportador de placas emergir do instrumento, cuidadosamente remova e

esvazie a placa de drenagem.

12. Substitua os 3 frascos de água livre de ATP por 3 frascos contendo solução de limpeza MLS 3M (do kit cód. 3005).

13. Em Utility/Dispensers, selecione Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e então selecione 6 bombadas (strokes). Insira a

placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK.

14. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

15. Substitua os 3 frascos de solução de limpeza por 3 frascos de água livre de ATP e realize a lavagem/limpeza dos injetores A, B e C por 20

bombadas.

16. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

17. Repita o processo de lavagem/limpeza novamente (passos 12 a 16).

O ajuste inicial do instrumento está agora completo. O instrumento está pronto para realizar o ensaio de veriﬁcação de controle de reagentes

49

(consulte a seção 7).

NOTA: Se o instrumento não for usado imediatamente, a solução de limpeza MLS 3M deve permanecer nas linhas de reagentes. As linhas de

reagentes devem ser sempre enxaguadas com 20 bombadas de água livre de ATP antes que a veriﬁcação de controle de reagentes ou o teste de

produtos comece.

5. PREPARANDO O INSTRUMENTO MLS-USB PARA TESTAR AS AMOSTRAS

‘Esta seção se aplica a um instrumento MLS-USB que tenha completado, com sucesso, o processo de preparo do instrumento para uso inicial

(seção 4).

1. Ligue em primeiro lugar o instrumento MLS-USB e, em seguida, o PC.

2. Aparecerá uma tela de login. Pressione a tecla ENTER, deixando o campo Password em branco.

3. Espere o instrumento completar o autoteste.

5.1 Lavando Os Injetores

Esta seção pressupõe que as linhas de reagentes contêm solução de limpeza MLS 3M.

1. Depois de que o autoteste é concluído, coloque cuidadosamente 3 frascos de água livre de ATP na prateleira de frascos (parte superior direita

do instrumento).

2. Selecione Utilities no menu principal e então Dispensers no menu da barra de rolagem. Clique em Initialize para preparar as seringas.

3. Uma vez que as seringas estejam iniciadas, clique em Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e então selecione 20

bombadas (strokes). Insira a placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK, para enxaguar os injetores.

NOTA: Durante o processo de lavagem/limpeza, ﬂuido é passado pelos injetores e tubos de reagente e então pela placa de drenagem. O

instrumento não permitirá que o processo de lavagem/limpeza comece, a não ser que a placa de drenagem seja detectada no transportador

de placas.

4. Conﬁrme o movimento do ﬂuido dentro das seringas durante a operação inicial. É normal que exista ar nas linhas de reagentes durante as

primeiras 1 ou 2 aspirações, mas ele deve desaparecer rapidamente após ﬂuido ser injetado nas linhas.

5. Quando o processo de lavagem/limpeza estiver concluído e o transportador de placas emergir do instrumento, cuidadosamente remova e

esvazie a placa de drenagem.

6. Substitua os 3 frascos de água livre de ATP por 3 frascos contendo a solução de limpeza MLS 3M.

7. Em Utility/Dispensers, selecione Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e então selecione 6 bombadas (strokes). Insira a

placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK.

8. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

9. Substitua os 3 frascos de solução de limpeza por 3 frascos de água livre de ATP e realize a lavagem/limpeza dos injetores A, B e C por 20

bombadas.

10. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

5.2 Iniciando Os Injetores

1. Carregue os reagentes do ensaio (extratante, ATPase e L/L1) no instrumento.

2. No menu Utility/Dispensers, selecione Prime Injectors. Selecione os injetores A, B e C e selecione 4 bombadas (strokes).

3. Insira a placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK.

4. Uma vez que a iniciação esteja concluída, cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

O instrumento está pronto para realizar a veriﬁcação de reagente controle (consulte a seção 7).

6. PREPARO DOS REAGENTES MLS PARA A VERIFICAÇÃO DE REAGENTE CONTROLE E ENSAIO UHT

6.1 Orientações Gerais Para Reagentes MLS:

• Reidrateosreagentesedeixequeelesatinjamtemperaturaambienteantesdeusar.Reagentesfriospodemproduzirleiturasbaixasem

RLUs e as amostras podem ser interpretadas incorretamente como estéreis (ou seja, resultado falso negativo).

50

• Nãousemétodosarticiaisparaaquecerosreagentes,jáqueissopodeinativá-los.

• Armazeneosreagentesa2-8°Cquandonãoestiverememuso.

• Nãocongelereagentes.

• ParaevitaracontaminaçãoporATP,nãotoquenaspontasdaspipetasounastampasdosfrascosdereagentescomasmãos,nemem

qualquer parte do instrumento MLS que ﬁque em contato direto com os reagentes.

6.2 Preparando Os Reagentes

L/L1:

1. AbraofrascodeenzimaL/L1liolizada(tampaverde).Removacuidadosamenteatampa;oconteúdoestásobvácuo.

2. Pipete ou verta todo o frasco de Tampão L/L1 (tampa dourada) no frasco de enzima L/L1.

3. Recoloque a tampa. Inverta o frasco duas vezes e então gire suavemente. NÃO AGITE!

4. O reagente L/L1 reidratado mantém a estabilidade por 12 horas em temperatura ambiente OU 5 dias quando armazenado entre 2 e 8°C.

ATPase:

1. AbraofrascodeenzimaATPaseliolizada.(tampaazul).Removaatampacomcuidado;oconteúdoestásobvácuo.

2. Pipete ou verta todo o frasco de Tampão ATPase (tampa dourada) no frasco de enzima ATPase.

3. Recoloque a tampa. Inverta o frasco duas vezes e então gire suavemente. NÃO AGITE!

4. O reagente ATPase reidratado mantém a estabilidade por 12 horas em temperatura ambiente OU 2 dias quando armazenado entre 2 e 8°C.

Preparando os reagentes

A solução de extratante está pronta para uso imediato, sendo estável à temperatura ambiente.

Tabela 1. Resumo de armazenamento, uso e estabilidade de reagentes MLS

REAGENTE Volume *

Nº testes por

frasco *

Armazenamento

Estabilidade

Função

2° - 8°C Ambiente

Extratante

125 mL >1200 Ambiente

12 meses

(ou validade

impressa no

frasco)

Rapidamente rompe as paredes celulares e libera ATP

microbiano

ATPase

Dilua com um

frasco inteiro de

Tampão ATPase

(9,5 mL)

150 2° - 8°C 2 dias 12 horas

Rompe células somáticas, degrada ATP somático/livre na

amostra;leiturasmenores“preliminares”,parapermitira

detecção da contaminação microbiana

L/L1

Dilua com um

frasco inteiro de

Tampão L/L1 (35

mL)

>300 2° - 8°C 5 dias 12 horas Reage com ATP, para disparar a reação luminosa

Controle de

ATP

H2O livre de ATP

(1,0 mL)

20 2° - 8°C 24 horas 12 horas Testa a integridade do instrumento e dos reagentes do ensaio

* Os volumes e quantidades de testes/frascos mostrados se referem aos kits de triagem de produtos lácteos UHT MLS 3M™ cód. 3000DPQCOG e

cód. 3060. Os volumes de reagentes diferem para os outros kits .

7. ENSAIO DE VERIFICAÇÃO DE REAGENTE CONTROLE

Veriﬁque o desempenho dos reagentes e do sistema usando um kit de ATP controle (cód. 3004 nos EUA, cód. LWATP10 ou ATP10 fora dos EUA).

Deve-se efetuar uma veriﬁcação de reagente controle todos os dias, antes do início dos testes de produtos.

51

7.1 Preparando O Atp Controle

NOTA: Esta seção se refere ao ATP controle cód. 3004. Consulte a bula do kit para o padrão ATP cód. LWATP10 e ATP10.

1. AbracomcuidadoumfrascodeATPliolizado;tomecuidadoparanãotocaratampadeborracha.Pipete1,0mLdeágualivredeATPno

frasco. Recoloque a tampa e inverta o frasco de 5 a 10 vezes. Aguarde pelo menos 5 minutos para que o ATP reidrate antes do uso.

• 1,0mLdeATPcontémvolumesucientepara20poçosou5vericaçõesdereagentescompletas.

• AsoluçãodeATPreidratadamantémaestabilidadepor24horas,quandoarmazenadaentre2e8°C.

2. Prepare ATPase e L/L1 novos OU conﬁra se os reagentes reidratados previamente foram preparados recentemente. Consulte a seção 6 para

instruções de preparo dos reagentes e informações de estabilidade.

7.2 Preparo Dos Instrumentos

Esta seção pressupõe que os procedimentos descritos na seção 5 foram completamente realizados.

1. Carregue os reagentes do ensaio (extratante, ATPase e L/L1) no instrumento.

2. Em Utilities/Dispensers, selecione Prime Injectors. Selecione os injetores A, B e C e 4 bombadas de reagente. Clique em OK para iniciar

as linhas de reagentes.

3. Conﬁrme se há uma placa de drenagem no transportador de placas.

4. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

5. O instrumento está pronto para começar a veriﬁcação de reagente controle.

7.3 Instruções Para A Veriﬁcação De Reagente Controle

Esta seção pressupõe que as linhas de reagentes já foram iniciadas.

1. Usandoumatirade6micropoços(cód.3008),pipete50µLdeATPreidratadoemcadaumdosúltimos4micropoços(poçosC1-F1,deixando

os poços A1 e B1 vazios). Não deposite ATP nas laterais dos poços.

2. Coloque a tira de micropoços em um suporte para tira de micropoços (cód. 3009) e coloque o suporte no transportador de placas do

instrumento, de modo que o poço A1 ﬁque no canto superior esquerdo do transportador de placas (mais próximo ao instrumento).

3. Clique no botão Reagent do menu principal. Complete a seção Lot Information, se desejado.

4. Forneça o nome do arquivo e as informações do usuário e então clique em OK, para começar a veriﬁcação de reagente controle. Este ensaio

é pré-programado para 6 poços de teste e o ATP controle nos poços C1-F1.

5. O resultado sai em aproximadamente 3 minutos.

6. Depois de resultados favoráveis na veriﬁcação de reagentes , o instrumento e os reagentes estão prontos para uso.

7. Realize os testes de esterilidade de produto lácteo UHT de acordo com a seção 8 ou seu protocolo especíﬁco.

7.4 Interpretação Dos Resultados

Em geral, os resultados de veriﬁcações de reagente controle bem-sucedidos são os seguintes:

Os poços A1 e B1 contêm ATPase, extratante e L/L1, servindo como controle negativo (sem ATP).

• Leituras< 35 RLU em ambos os poços indicam que não existe contaminação no instrumento ou reagentes.

Os poços C1 e D1 contêm ATP, ATPase, extratante e L/L1.

• Leituras< 150 RLU em ambos os poços indicam que a enzima ATPase está ativa.

Os poços E1 e F1 contêm ATP, extratante e L/L1 (mas não ATPase), servindo como controle positivo.

• Leituras> 4000 RLU em ambos os poços indicam que o reagente L/L1 e o ATP controle estão ativos.

NOTA: Os critérios de aprovação mostrados acima se referem ao kit de controle de reagente ATP cód. 3004. Os critérios de aprovação para os

reagentes de controle do sistema ATP cód. LWATP10 e ATP10 são mostrados na tabela 2, abaixo. Os critérios de aprovação/reprovação para

veriﬁcações de reagente controle e testes de UHT podem variar, de acordo com as exigências do produto e do usuário.

52

Tabela 2. Valores padrão de “aprovado” para veriﬁcações de reagente controle

POÇO

Para o kit de controle de reagente ATP MLS 3M

cód. 3004

RLU

Para o kit de controle de reagente ATP MLS 3M

cód. LWATP10 e ATP10

RLU

A1 < 35 < 35

B1 < 35 < 35

C1 < 150 < 35

D1 < 150 < 35

E1 > 4000 > 1500

F1 > 4000 > 1500

7.5 Dicas De Solução De Problemas

1. Se o procedimento de veriﬁcação de reagentes der uma leitura insatisfatória, repita o procedimento com um novo frasco de ATP e/ou ATPase

e L/L1. Certiﬁque-se de que as linhas de reagentes foram iniciadas. Se a veriﬁcação de reagentes falhar novamente, isso pode indicar um

problema com um ou mais reagentes ou com o próprio instrumento MLS.

2. Veriﬁque a data de validade em todos os frascos de reagentes e assegure-se de que os reagentes tenham sido armazenados corretamente.

Os prazos de validade dos reagentes reidratados são os seguintes:

• ATPase:2diasa2-8°C

• L/L1:5diasa2-8°C

• ATPcontrole=24horasa2-8°C

Consulte o apêndice II para mais dicas de solução de problemas.

8. TESTES DE ESTERILIDADE DE PRODUTOS LÁCTEOS UHT

Existem kits de triagem de produtos lácteos UHT MLS 3M disponíveis para uso com este instrumento. Estes kits utilizam a bioluminescência

do ATP para detectar ATP microbiano (contaminante) em laticínios e derivados estéreis. -Os reagentes do kit foram concebidos de forma a

excluir ATP de fontes não microbianas e medir exclusivamente ATP microbiano. A detecção de ATP microbiano (independentemente dos critérios

apropriados de aprovação/reprovação) indica contaminação microbiana do produto.

8.1 Preparo Das Amostras Para Teste

1. Incube o produto para teste em sua embalagem original, sem abrir, pelo tempo e temperatura especiﬁcados no protocolo de testes do

usuário.

2. Após a incubação, agite o produto, para homogeneizar a amostra. Abra as embalagens com cuidado.

8.2 Preparo Do Ensaio

1. Prepare os reagentes (seção 6)

2. Realize uma veriﬁcação de reagente controle (seção 7) antes de testar o produto.

3. Pipete50µldaprimeiraamostranopoçoA1deumamicroplaca(cód.3007).Useumaponteiranovaparacadaamostra.Nãodepositea

amostra nas laterais dos poços.

4. Repita o passo 3 para todas as amostras. Sempre coloque as amostras na ordem correta (poços A1 a H1, em seguida A2 a H2 e assim por

diante).

5. Carregue os reagentes no instrumento da seguinte forma:

• ExtratantenaposiçãoA do injetor

• ATPasenaposiçãoB do injetor

• L/L1naposiçãoC do injetor

53

6. Coloque a placa de ensaios com as amostras carregadas dentro do instrumento, de forma que o poço A1 ﬁque no canto superior esquerdo do

transportador de placas (mais próximo ao instrumento).

7. Selecione UHT Assay na barra de menus e forneça o nome do arquivo, o operador e o número de amostras a serem testadas. Clique em Start

para iniciar o ensaio.

8. Os ensaios serão exibidos em RLUs (Unidades Relativas de Luz), depois que todas as amostras forem analisadas (40 minutos para 96

amostras).

9. Se desejado, uma amostra de controle negativo (por exemplo, amostra estéril ou amostra não incubada) pode ser incluída com as amostras

em teste. Uma amostra de controle positivo (por exemplo, leite cru) também pode ser incluída.

10. Quando os testes do dia estiverem concluídos, enxágüe as linhas de reagentes com água livre de ATP e solução de limpeza, de acordo com o

procedimento de limpeza diário (consulte a seção 9).

8.3 Interpretação Dos Resultados:

Comoparâmetro,umaleitura<150RLUsignicaumresultadoaprovado;noentanto,oscritériosdeaprovação/reprovaçãopodemvariarde

acordo com o produto e os requisitos do cliente. Para assistência, entre em contato com um representante da assistência técnica.

9. LIMPANDO O INSTRUMENTO APÓS OS TESTES

No decorrer do uso normal, pode ocorrer contaminação microbiana e formação de bioﬁlme no instrumento MLS. O kit de limpeza de injetores

MLS 3M (cód. 3005) ajuda a prevenir contaminação microbiana e formação de bioﬁlme nos injetores e linhas de reagentes, evitando assim

leituras de base altas, resultados falsos positivos e a aplicação imprecisa dos reagentes. Como parte da manutenção correta do seu instrumento

MLS, use o kit de limpeza de injetores MLS 3M, ao menos, uma vez por dia.

1. Carregue 3 frascos de água livre de ATP nos suportes de frascos do instrumento MLS.

2. No menu Utility/Dispensers, selecione Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e selecione 20 bombadas (strokes). Insira a

placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK, para enxaguar os injetores.

3. Quando o ciclo de lavagem estiver concluído, remova e esvazie a placa de drenagem.

4. Substitua os 3 frascos de água livre de ATP por 3 frascos contendo a solução de limpeza MLS 3M.

5. No menu Utility/Dispensers, selecione Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e selecione 6 bombadas (strokes). Insira a placa

de drenagem no transportador de placas e clique em OK, para lavar os injetores.

6. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

7. Substitua os 3 frascos de solução de limpeza por 3 frascos de água livre de ATP e realize a lavagem/limpeza das linhas de reagentes A, B e C

por 20 bombadas. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

NOTA: Quando o instrumento não estiver sendo usado, a solução de limpeza MLS 3M deve permanecer nas linhas de reagentes. Sempre

enxágüe as linhas de reagentes com 20 bombadas de água livre de ATP antes que a veriﬁcação de reagente controle ou o teste de

produtos comece.

10. DESLIGANDO O SISTEMA

1. Para fechar o software Revelation, clique no botão X no canto superior direito da tela do software. Será exibida uma mensagem, perguntando

se você deseja salvar os resultados. Selecione Yes (Sim) para os conjuntos de resultados que quiser salvar.

2. No menu Iniciar, no canto inferior esquerdo da tela do computador, selecione Desligar o computador. Aguarde até que seja exibida uma

mensagem.

3. Após ser exibida a mensagem que informa que você já pode desligar seu computador com segurança, desligue o instrumento MLS-USB,

usando o interruptor liga/desliga localizado no canto inferior direito da parte frontal do instrumento.

54

11. LIMPEZA DE MANUTENÇÃO

No decorrer do uso normal, pode ocorrer contaminação microbiana e formação de bioﬁlme no instrumento MLS. A Solução de manutenção

3MMLS(nº3006nosEUA;BMLSCKforadosEUA)removeosresíduosdeproteínaeacontaminaçãomicrobiananosinjetoresenaslinhas

de reagente, evitando assim leituras altas em segundo plano, resultados falso-positivos e descarte impreciso de reagentes. Para manter

adequadamente o instrumento MLS, use a solução de remoção de proteína de manutenção MLS 3M pelo menos uma vez por semana.

Aviso de segurança importante: Cuidado - A solução de manutenção MLS 3M é CORROSIVA. Leia a Ficha Individual de Segurança de Produto

Químico (FISPQ) antes de usar este kit pela primeira vez. Tome todas as precauções necessárias. Use equipamento para proteção dos olhos,

luvas e roupas de proteção. Tome cuidado quando esvaziar a placa de drenagem.

1. Carregue 3 frascos de água livre de ATP (do kit de limpeza de injetores MLS 3M, cód. 3005), nos suportes de frascos do instrumento.

2. No menu Utility/Dispensers, selecione Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e selecione 20 bombadas (strokes). Insira a

placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK, para enxaguar os injetores.

3. Quando o ciclo de lavagem estiver concluído, remova e esvazie a placa de drenagem.

4. Substitua os frascos de água livre de ATP por 3 frascos contendo a solução de remoção de proteínas do kit de manutenção MLS 3M.

5. No menu Utility/Dispensers, selecione Wash/Purge Injectors. Selecione os injetores A, B e C e selecione 6 bombadas (strokes). Insira a

placa de drenagem no transportador de placas e clique em OK, para lavar os injetores.

6. Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem. Deixe a solução de remoção de proteínas nas linhas de reagentes por pelo menos

20 minutos.

7. Substitua os frascos de solução de remoção de proteínas por 3 frascos de água livre de ATP e realize a lavagem/limpeza das linhas de

reagentes A, B e C por 20 bombadas.

Cuidadosamente remova e esvazie a placa de drenagem.

NOTA: Um precipitado de cor vermelha pode surgir temporariamente quando a solução de manutenção entra em contato com a solução de

limpezaouoextratanteBDK.Seissoforobservado,éessencialenxaguaraslinhasdereagentesporcompleto,usandoágualivredeATP,

antes de preparar o instrumento com reagentes. Consulte a seção 9 para instruções de limpeza.

8. Realize uma veriﬁcação de reagente controle antes de testar as amostras (seção 7).

A tabela 3 resume a manutenção de rotina recomendada para o produto MLS-USB:

Tabela 3. Programação de manutenções de rotina para usuários do MLS-USB

AÇÃO RECOMENDADA

Freqüência

DIARIAMENTE SEMANALMENTE

Enxágüe as linhas de reagentes com água livre de ATP (na inicialização

e entre ensaios UHT)

X

Limpe as linhas, usando solução de limpeza de injetores e água livre

de ATP

X

Limpe os injetores A, B e C com solução de manutenção X

12. MOVENDO O INSTRUMENTO MLS-USB PARA OUTRA BANCADA

1. Remova os reagentes dos suportes de frascos.

2. Veriﬁque se a tubulação de reagentes está ﬁrmemente ﬁxada.

3. Abra a porta do transportador de placas e coloque os três blocos de espuma de transporte ao redor do transportador de placas (consulte a

folha de instruções de abertura de embalagem do instrumento).

55

4. Enquanto movimentar o instrumento, mantenha-o em pé e nivelado.

5. Coloque cuidadosamente o instrumento na superfície desejada. Abra a porta do transportador de placas e remova os blocos de espuma, que

estão ao redor do transportador de placas.

6. Limpe e mantenha as linhas de reagente com solução de limpeza MLS 3M até o próximo teste (seção 9).

Para informações de produtos 3M Microbiologia: www.3M.com/microbiology

Marcas comerciais

3M e Biotrace são marcas comerciais da 3M ou da Biotrace International PLC, uma empresa da 3M, sendo usadas sob licença no Canadá.

Microsoft e Windows são marcas comerciais registradas ou marcas comerciais da Microsoft Corporation nos Estados Unidos e/ou em outros

países.

As imagens de telas e ilustrações usadas nesta documentação de software podem mostrar marcas comerciais e nomes de marcas obsoletos,

usados no passado. A 3M continuará a atualizar esta documentação com marcas comerciais e nomes de marcas utilizados atualmente.

APÊNDICE I

CÁLCULOS DE USO DE REAGENTES *

Extratante

O frasco contém 125 mL

1,5 mL necessário para o preparo do sistema + 0,5 mL para reserva na linha

125mL-2,0mLparapreparo/reserva=123mLdeextratanteutilizável

CadatesteUHTexige~100µL,logo1mL=10testes

123mLdeextratantex10testes/mL=>1200testesporfrasco

ATPase

O frasco reidratado contém 9,5 mL

1,5 mL necessário para a preparo do sistema + 0,5 mL para reserva na linha

9,5mL-2,0mLparapreparo/reserva=7,5mLdeATPaseutilizável

CadatesteUHTexige50µL,logo1mL=20testes

7,5mLdeATPasex20testes/mL=>150testesporfrasco

L/L1

O frasco reidratado contém 35 mL

1,5 mL necessário para a preparo do sistema + 1,5 mL para reserva na linha

35mL-3,0mLparapreparo/reserva=32mLdeL/L1utilizável

CadatesteUHTexige~100µL,logo1mL=10testes

32mLdeL/L1x10testes/mL=>320testesporfrasco

Os frascos dos reagentes ATPase e L/L1 são graduados, permitindo que o usuário avalie visualmente o número aproximado de testes que ainda

podem ser realizados com cada frasco de reagente.

* Cálculos referentes aos kits de triagem de produtos lácteos UHT MLS 3M cód. 3000DPQCOG e 3060. Os volumes de reagentes de outros kits

diferem.

56

APÊNDICE II

VERIFICAÇÃO DE REAGENTE CONTROLE – VISÃO GERAL DE SOLUÇÃO DE PROBLEMAS

POÇOS

CONTROLE

POÇO

CONTEÚDO

TESTES PARA:

CRITÉRIOS

DE

APROVAÇÃO

* (RLU)

CENÁRIOSDERESULTADOS:

A B C D E F G

A1

Ext,

ATPase, L/

L1 (sem

ATP)

Contaminação

do reagente

<35 6

36

5 7 9

154

4

B1 <35 5

37

7 8 7

189

8

C1

Ext,

ATPase, L/

L1, ATP

Atividade de

ATPase

<150 8

155

6

158 4100 204

11

D1 <150 9

165

9

97 2950 132

12

E1

Ext, L/L1,

ATP

(sem

ATPase)

ATP de

controle,

atividade de

L/L1

>4000 5653 5127

6

5276 5348

10578 3800

F1 >4000 5240 5497

9

4930 5067

14573 3100

Resultados

OK

Problema em

potencial:

Problema em

potencial:

Problema em

potencial:

Problema em

potencial:

Problema em

potencial:

Problema em

potencial:

* Os poços

A1-D1

são falhas

marginais;

podem

indicar um

problema de

contaminação

ou bioﬁlme

nas linhas de

reagentes

* L/L1 não

aplicada

corretamente

* Sem ATP

controle nos

poços E1, F1

* Tira de poços

colocada

horizontalmente

no suporte

* ATP dontrole

deixado na

parede dos

poços C1, D1

* Técnica de

pipetagem

inadequada

* ATPase

não aplicada

corretamente *

ATPase inativa

* Contaminação

ou bioﬁlme

nas linhas de

reagentes

* Redução do

ATP controle

e/ou atividade

de L/L1

decorrente

de alta

temperatura

ambiente

* A sonda

C não está

dispensando

corretamente

Soluções em

potencial:

Soluções em

potencial:

Soluções em

potencial:

Soluções em

potencial:

Soluções em

potencial:

Soluções em

potencial:

*Remova os

reagentes sem

recuperá-los

* Substitua os

frascos âmbar

eassoluções;

enxágüe as

linhas de

reagente com

água livre de

ATP nova e

solução de

limpeza

* Procedimento

de

manutenção

* Repita a

veriﬁcação

de reagente

controle

* Veriﬁcação

do sistema

hidráulico

na sonda C:

veriﬁque se a

dispensa está

correta * Repita

a veriﬁcação

de reagente

controle

* Repita a

veriﬁcação

de reagentes,

tomando

cuidado em

pipetar ATP

controle no

fundo dos

micropoços

* Repita a

veriﬁcação

de reagente

controle

* Veriﬁcação

do sistema

hidráulico

na sonda B:

veriﬁque se a

dispensa está

correta

* Substitua a

ATPase

* Repita a

veriﬁcação

de reagente

controle

* Remova os

reagentes

sem recuperá-

los

* Substitua os

frascos âmbar

eassoluções;

enxágüe as

linhas de

reagente com

água livre de

ATP nova e

solução de

limpeza *

Procedimento

de

manutenção

* Repita a

veriﬁcação

de reagente

controle

* Veriﬁque a

temperatura

do laboratório

edoMLS;

devem ser <

25°C * Repita

a veriﬁcação

de reagente

controle,

usando novo

ATP controle e/

ou L/L1

* Procedimento

de manutenção

* Os critérios de aprovação se referem ao kit de controle de reagente ATP cód. 3004. Consulte o encarte do kit para o ATP padrão cód. LWATP10 e ATP10.

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3M Microbial Luminescence System MLSII, 1 ea Instruções de operação

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