Roche VENTANA PD-L1 (SP142) Assay Interpretation Guide

Marca: Roche

Modelo: VENTANA PD-L1 (SP142) Assay

Tipo: Interpretation Guide

VENTANA PD-L1 (SP142) Assay

Guia de interpretação para

carcinoma de células não pequenas do pulmão

Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1%TC ou ≥1%IC

2 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 3

Índice

Introdução 4

Utilização prevista 5

Aplicação do produto 5

Objetivo do guia de interpretação 5

Avaliação clínica 6

Visão geral da coloração 6

Algoritmo de pontuação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay —

NSCLC 7

Fluxo da amostra 9

Controlos 10

Caraterísticas de coloração — NSCLC 11

Diferenciação entre coloração das TC e das IC: 15

Método de pontuação 17

Pontuação de agregados de IC com coloração de PD-L1: 18

Pontuação das células individuais de IC dispersas com

coloraçãodePD-L1: 19

Métodos de pontuação: desafios e armadilhas 20

Imagens de referência 23

Expressão de TC 23

Expressão de IC — Agregados 24

Expressão de IC — Dispersão de células individuais 25

Casos de exemplo: TC <1% e IC <1% 26

Casos de exemplo: TC ≥1%, IC ≥1% 28

Casos de exemplo: TC <1%, mas IC ≥1% 30

Casos desafiantes 32

Artefactos de coloração 34

Impacto das condições pré-analíticas no

VENTANA PD-L1 (SP142) Assay 37

Condições de fixação aceitáveis para alcançar ótimos resultados

decoloração com o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay 37

Estabilidade do antigénio nas secções de tecido cortado 38

Referências 39

4 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Introdução

O VENTANA PD-L1 (SP142) Assay é um ensaio imunohistoquímico que utiliza

um anticorpo monoclonal primário de coelho anti-PD-L1 para reconhecer

a proteína do ligando do recetor de morte celular programada 1 (PD-L1).

Esteensaio foi desenvolvido conjuntamente pela Roche/Ventana Medical

Systems, Inc. e pela Roche/Genentech para identiﬁcar pacientes com

carcinoma localmente avançado ou carcinoma de células não pequenas

do pulmão (NSCLC) metastático com maior probabilidade de responder ao

tratamento com TECENTRIQ® (atezolizumab).

Há várias décadas que o carcinoma do pulmão é o cancro mais comum a

nível mundial, continuando a ser a principal causa de morte por cancro em

todo o mundo. Estima-se que represente 12,9% de todos os novos casos de

cancro, sendo responsável por aproximadamente 1,59milhões de mortes

anuais em todo o mundo ou aproximadamente uma em cada cinco mortes

relacionadas com o cancro.

Só nos Estados Unidos, prevê-se a ocorrência

de aproximadamente 234030 novos casos de cancro do pulmão e 154050

mortes relacionadas com carcinoma do pulmão em 2018.

Embora tenham sido

feitas melhorias no diagnóstico e opções terapêuticas, o prognóstico continua

fraco com baixas taxas de sobrevivência a longo prazo para todos os estádios.

Aolongo das últimas três décadas, as taxas de sobrevivência do carcinoma do

pulmão foram as que demonstraram a menor melhoria, em comparação com

outros cancros.

O carcinoma de células não pequenas do pulmão (NSCLC), um dos dois

principais tipos de carcinoma do pulmão, representa aproximadamente 75%

de todos os casos de carcinoma do pulmão.

Em mais de metade dos pacientes

recém-diagnosticados com NSCLC, a doença já se encontra metastizada,

reduzindo signiﬁcativamente a probabilidade de sobrevivência. A taxa de

sobrevivência relativa a 5 anos para o NSCLC diagnosticado como doença

distante é de 5,2%.

A maioria dos pacientes com NSCLC apresenta um quadro

de doença localmente avançada inoperável (Estádio IIIB) ou doença metastática

(Estádio IV). Nenhuma delas possui atualmente quaisquer opções de

tratamento curativo, pelo que, em média, estes pacientes morrem no prazo de

um ano após o diagnóstico. Através de uma melhor compreensão dos eventos

moleculares subjacentes à patogénese do carcinoma do pulmão, é possível

produzir melhorias no resultado clínico deste carcinoma, identiﬁcando novos

alvos de biomarcadores e desenvolvendo novas opções de tratamento.

A PD-L1 é uma proteína transmembranar que regula as respostas imunitárias

para um nível inferior ligando-se aos seus dois recetores, morte programada 1

(PD-1) e B7.1 (Figura 1). O PD-1 é um recetor inibitório expresso nas células

T após a ativação das células T, que é mantido em estados de estimulação

crónica, como acontece na infeção crónica ou no cancro.

A ligação da PD-L1

ao PD-1 inibe a proliferação de células T, a produção de citocina e a atividade

citolítica, levando à inativação funcional ou exaustão das células T. A B7.1 é

uma molécula expressa em células com presença de antigénios e em células

Tativadas. A ligação de PD-L1 a B7.1 em célulasT e em células com presença

de antigénios pode mediar a regulação, para um nível inferior, das respostas

imunitárias, incluindo a inibição da ativação das célulasT e a produção de

citocina.

A expressão de PD-L1 tem sido observada em células imunitárias

e células malignas.

7,8

A expressão aberrante de PD-L1 nas células tumorais

(TC) foi reportada para impedir a imunidade antitumoral, resultando em

Figura 1: Via PD-1, PD-L1

evasão imunitária.

Por conseguinte, a interrupção do caminho de PD-L1/PD-1

representa uma estratégia atraente para revigorar a imunidade das célulasT

especíﬁcas de tumores suprimidas pela expressão de PD-L1 no microambiente

tumoral. A expressão elevada de PD-L1 foi reportada como estando associada

aum diagnóstico fraco em pacientes com NSCLC.

Atezolizumab é um anticorpo monoclonal, humanizado, com engenharia da

região Fc, que se liga à PD-L1 e bloqueia as interações com os recetores PD-1 e

B7.1. Atezolizumab é uma imunoglobulina IgG1 kappa não glicosilada com uma

massa molecular calculada de 145kD.

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 5

Utilização prevista

Aplicação do produto

Consulte o folheto informativo do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para mais

informações sobre a utilização prevista deste produto.

Nota: a utilização deste diagnóstico com as terapêuticas indicadas poderá

não estar aprovada em todos os países. Contacte o seu representante local da

Roche para obter as aprovações locais.

Objetivo do guia de interpretação

O Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay foi concebido

paraajudar os patologistas a interpretar e a pontuar os tecidos de NSCLC

corados com o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay.

• As fotomicrograﬁas incluídas neste guia de formação ilustram os padrões

decoloração, bem como o intervalo de pontuações de PD-L1, que pode

estarpresente nos tecidos de NSCLC corados com o VENTANA PD-L1

(SP142) Assay.

• É abordada a utilização da amígdala como controlo tecidular no contexto

da avaliação de PD-L1, bem como o desempenho e as caraterísticas de

coloração associados.

• São também abordados casos desaﬁantes, artefactos do processo

decoloração e o impacto de condições pré-analíticas no ensaio.

6 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Avaliação clínica

Visão geral da coloração

A coloração imunohistoquímica (IHC) com VENTANA PD-L1 (SP142) Assay

demonstrou coloração em células tumorais (TC, Figura2) bem como em

células imunitárias tumorais inﬁltrativas (IC, Figura3). As caraterísticas de

coloração são descritas em detalhe na secção Caraterísticas de coloração.

Figura 2: Tecido de NSCLC com coloração circunferencial moderada a forte da membrana das TC.

Figura 3: Tecido de NSCLC com coloração castanho-escura pontilhada e linear nas IC.

H&E 20x

PD-L1 20x

H&E 20x

PD-L1 20x

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 7

Tabela 1: Algoritmo de pontuação em vários passos do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — ≥1%TC ou ≥1%IC

Passo 1: Avaliação da coloração das células tumorais (TC) Expressão de PD-L1

Presença de coloração discernível da membrana da PD-L1 de qualquer intensidade

em≥1% das células tumorais

≥1% TC

Ausência de coloração discernível da PD-L1 (OU) Presença de coloração discernível

damembrana da PD-L1 de qualquer intensidade em <1% das células tumorais.

Avançar para o Passo 2

Passo 2: Avaliação da coloração das células imunitárias tumorais

inﬁltrativas (IC)

Expressão de PD-L1

Presença de coloração discernível de PD-L1 de qualquer intensidade nas células

imunitárias tumorais inﬁltrativas sobre ≥1% da área tumoral ocupada pelas células

tumorais e estromas intratumoral e peritumoral contíguo associados

≥1%IC

Ausência de coloração discernível de PD-L1 (OU) Presença de coloração discernível

de PD-L1, de qualquer intensidade, nas células imunitárias tumorais inﬁltrativas sobre

<1% da área do tumor ocupada pelas células tumorais e estromas intratumoral e

peritumoral contíguo associados

<1% TC e <1% IC

Algoritmo de pontuação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay — NSCLC

O tecido de NSCLC corado com VENTANA PD-L1 (SP142) Assay será pontuado utilizando uma abordagem em vários passos de acordo com os critérios deﬁnidos

na Tabela1. As TC são pontuadas de acordo com a proporção de células tumorais viáveis com coloração da membrana da PD-L1 de qualquer intensidade.

AsICsãopontuadas conforme a proporção de área de tumor ocupada pelas IC com coloração de PD-L1 de qualquer intensidade. Deve-se considerar que uma

amostra tem uma expressão signiﬁcativa de PD-L1 se esta exibir ≥1%TC ou ≥1%IC. As lâminas coradas do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay serão primeiro

avaliadas relativamente à coloração das TC (Passo1 na Tabela1). Se a amostra tiver qualquer coloração discernível da membrana da PD-L1, de qualquer

intensidade, em ≥1% das TC, atribui-se um nível de expressão de PD-L1 ≥1% TC ao caso. Se a amostra tiver <1% de coloração das TC, a lâmina será então avaliada

relativamente à coloração das IC (Passo2 na Tabela1). Se a amostra tiver coloração de PD-L1, de qualquer intensidade, em IC que cubra ≥1% da área do tumor,

onível de expressão de PD-L1 atribuído ao caso será ≥1%IC. Se a amostra tiver uma coloração de PD-L1, de qualquer intensidade, em IC que cubra <1% da área

dotumor, o nível de expressão de PD-L1 atribuído ao caso será <1%TC e <1%IC. O processo de pontuação em passos é ilustrado na Figura4.

São aceitáveis amostras de tecidos de NSCLC obtidas a partir de ressecções, excisões, biópsias por agulha grossa e outros procedimentos de biópsia de locais

primários e metastáticos. Este ensaio não foi validado para utilização com amostras de citologia ou amostras de osso descalciﬁcado. Um tecido é considerado

adequado para a interpretação com o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay se tiver pelo menos 50 células tumorais viáveis; o estroma associado ao tumor não

énecessário para a pontuação das TC. A presença de estroma associado ao tumor é essencial para a pontuação das IC. São necessárias três secções para

a coloração de cada caso: uma secção em série para a coloração com hematoxilina e eosina (H&E), uma segunda secção para a coloração com controlo de

reagente negativo e uma terceira para a coloração com o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. Deverá ser utilizado tecido de amígdala benigno pré-qualiﬁcado

como controlotecidular positivo e negativo em cada processamento de coloração. Na Tabela 2 são apresentadas instruções detalhadas para a qualiﬁcação

e aceitabilidade do tecido de controlo. O tecido correspondente do paciente deverá ser corado com controlo de reagente negativo para controlar e avaliar

coloraçãode fundo não especíﬁca.

8 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Figura 4: Processo de pontuação em vários passos — VENTANA PD-L1 (SP142) Assay em tecidos de NSCLC (imagens com ampliação de 10x).

<1% TC e <1% IC

≥1%IC

≥1% TC

Sim Não

O tecido

de NSCLC

apresenta

expressão de

PD-L1 em ≥1%

das TC?

PASSO 1

Sim Não

O tecido de

NSCLCapresenta

≥1% da área do

tumor coberta deIC

comcoloração

dePD-L1?

PASSO 2

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 9

Fluxo da amostra

A amostra de tecido de NSCLC

é ﬁxada em formol neutro

tamponado a 10% durante

6a72horas.

As secções com uma espessura

de 4μm são montadas em

lâminas de vidro de microscópio

carregadas positivamente.

(3 secções em série necessárias)

Não Sim

A lâmina de H&E

é aceitável?

Repetir coloração**

Uma secção corada com VENTANA PD-L1 (SP142) Assay.

Uma secção corada com Rabbit Monoclonal Negative Control Ig

(Negative Reagent Control, NRC).

O tecido de amígdala é utilizado como controlo tecidular

positivoenegativo.

Estado da PD-L1 registado por um patologista

qualiﬁcado

Não

Sim

A lâmina de

controlo com

amígdala

é aceitável?

A lâmina de NRC

é aceitável?

A lâmina de IHC da

PD-L1 é aceitável?

Coloração com H&E efetuada.

NSCLC H&E

IHC da Amígdala

*O estroma associado ao tumor não é necessário para a pontuação das TC.

A presença de estroma associado ao tumor é essencial para a pontuação das IC.

* *A repetição pode ser efetuada no mesmo tecido ou noutro tecido do paciente,

conforme aplicável.

(Todas as imagens de NSCLC e amígdala com ampliação de 1x e 4x respetivamente)

NRC de NSCLC

IHC do NSCLC

Repetir coloração**

Adequação da amostra: pelo menos

50 células tumorais viáveis*

10 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Controlos

Os controlos tecidulares deverão ser utilizados apenas para monitorizar o correto desempenho dos tecidos processados, reagentes de teste e equipamentos e não

para auxiliar na formulação de uma pontuação especíﬁca para amostras de pacientes. Recomenda-se um controlo tecidular para cada conjunto de condições de

teste em cada processamento de coloração (são aceitáveis controlos na lâmina).

A amígdala humana benigna é um controlo tecidular ideal pois contém células epiteliais e imunitárias de coloração negativa e positiva que podem servir como

tecido de controlo positivo e negativo para o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay. O tecido de amígdala corado com o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay demonstrou

coloração em linfócitos e macrófagos nos centros germinativos, com coloração de PD-L1 em células imunitárias dispersas entre células negativas para PD-L1

nas regiões interfoliculares. Além disso, observa-se coloração difusa nas células do epitélio reticulado da cripta com ausência de coloração das células epiteliais

escamosas superﬁciais.

O tecido da amígdala ﬁxado em NBF a 10% e processado de forma semelhante aos tecidos do paciente deverá ser qualiﬁcado e utilizado como controlo tecidular.

O controlo tecidular com amígdala deverá demonstrar uma coloração aceitável para o ensaio ser aprovado. Se o tecido da amígdala demonstrar uma coloração

inaceitável, o ensaio é considerado inválido e deverá ser repetido, com a inclusão de amostras do paciente. Os critérios de qualiﬁcação e aceitabilidade para os

controlos tecidulares com amígdala são enumerados na Tabela2.

Tabela 2: Critérios de aceitabilidade e qualiﬁcação da amígdala

Aceitável Inaceitável

Elementos do tecido negativo: células imunitárias negativas para PD-L1 nas

regiões interfoliculares com epitélio escamoso superﬁcial negativo.

Coloração de fundo não especíﬁca excessiva obscurece a identiﬁcação de células

positivas para PD-L1.

Elementos de tecido positivo: coloração de PD-L1 moderada a forte observada

em linfócitos e macrófagos em centros germinativos, com coloração difusa em

células epiteliais reticulares da cripta.

Coloração de PD-L1 fraca a inexistente em linfócitos e macrófagos nos centros

germinativos e nas células do epitélio reticulado da cripta.

Epitélio escamoso

superﬁcial

PD-L1 20x

PD-L1 20xPD-L1 20x

PD-L1 4x

Coloração de fundo não

especíﬁca

Coloração fraca nos linfócitos,

macrófagos e células epiteliais

Epitélio da cripta

Centro germinativo

Região

interfolicular

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 11

Caraterísticas de coloração — NSCLC

A coloração de PD-L1 com o VENTANA PD-L1 (SP142) Assay nos tecidos

do NSCLC demonstra coloração em TC (Figura5-Figura7) e em IC

(Figura8-Figura12). As imagens deste guia de interpretação são de lâminas

digitalizadas; a ampliação é indicada para cada imagem.

Coloração das TC:

Figura 5: As TC exibem frequentemente coloração circunferencial moderada a forte, parcial ou completa da membrana com ou sem componente citoplasmático.

Figura 6: Por vezes, observa-se coloração fraca da membrana, sendo necessária uma ampliação elevada para a conﬁrmação.

H&E 20x PD-L1 20x

Coloração das TC fraca

H&E 20x

PD-L1 20x

Coloração das TC forte

12 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Coloração das IC:

As IC são células imunitárias presentes no estroma intratumoral e no estroma

peritumoral contíguo. A coloração com VENTANA PD-L1 (SP142) Assay

realça uma população heterogénea de células imunitárias; a maioria é

morfologicamente consistente com linfócitos, macrófagos, células dendríticas

e granulócitos.

Figura 8: As IC mostram coloração pontilhada ou linear castanho-escura, que é o padrão predominante de coloração das IC observado na maioria dos tecidos.

Acoloração das IC pode ser observada na forma de agregados nos estromas intratumoral ou peritumoral (interface tumor-estroma) ou em ambos os locais.

H&E 20x PD-L1 20x

Agregado de IC em

estroma

peritumoral

Agregado de IC em

estroma

intratumoral

Figura 7: A coloração da membrana basolateral pode ser observada como uma coloração circunferencial parcial e é incluída na pontuação.

H&E 40x PD-L1 40x

Coloração das TC basolateral

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 13

Figura 9: A coloração das IC também pode ser observada na forma de células individuais focais ou difusas dispersas ou pequenos agregados (dispersão de células

individuais) dispersos entre células tumorais. Este padrão pode ser observado em associação com agregados no estroma do tumor. A coloração das IC corresponde

a células imunitárias entre células tumorais na imagem de H&E.

H&E 40x PD-L1 40x

Células individuais de IC dispersas

entre células tumorais

Figura 10: Pode ser observado um padrão de coloração circunferencial de PD-L1 membranoso ou reticular nas IC.

H&E 20x

PD-L1 20x

Coloração circunferencial

das IC

Coloração reticular das IC

14 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Figura 11: A coloração das IC pode ser observada em neutróﬁlos, na forma de coloração pontilhada ﬁna. A coloração dos neutróﬁlos pode ser vista dispersa

entrecélulas tumorais, nos estromas intratumoral ou peritumoral. Neutróﬁlos intravasculares e/ou neutróﬁlos em áreas necróticas ou de abcesso não são

incluídosna pontuação.

H&E 40x PD-L1 40x

Figura 12: Os macrófagos alveolares podem apresentar coloração circunferencial de intensidade moderada a forte na membrana. A análise da lâmina de H&E

correspondente pode ajudar a diferenciar esta coloração da coloração das TC.

H&E 40x PD-L1 40x

Macrófagos

alveolares

Neutróﬁlos

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 15

Diferenciação entre coloração das TC e das IC:

A coloração das TC pode ser observada em associação com coloração das IC.

A análise da lâmina H&E correspondente, em conjunto com uma análise com

grande ampliação da lâmina corada com PD-L1, irá ajudar a diferenciar as

TC das IC. Esta análise, juntamente com uma análise com grande ampliação

da lâmina com PD-L1 corada, poderá ajudar a diferenciar entre coloração

das TC e coloração das IC. As seguintes imagens mostram diferentes padrões

normalmente observados na prática clínica, quando a coloração das TC e das IC

é observada em conjunto (Figura13-Figura15).

Figura 13: As TC mostram forte coloração na membrana, com IC raras entre as células tumorais identiﬁcadas na H&E. Neste cenário, as IC devem ser pontuadas

em áreas que não demonstrem uma coloração forte das TC.

Figura 14: As TC mostram coloração fraca a moderada da membrana, com muitas IC entre as TC identiﬁcadas na H&E. Note a presença da forte coloração

pontilhada das IC entre as TC.

H&E 20x

PD-L1 20x

IC raras a inexistentes entre

as TC na H&E

Coloração das TC

forte

Agregado de IC no estroma

Coloração das IC dispersas

entre células tumorais

Numerosas IC entre

as TC na H&E

Coloração das TC

fraca

16 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Figura 15: Se a H&E não mostrar muitas IC identiﬁcáveis e for observado um padrão de coloração granulado ou em forma de contas nas TC, a coloração deverá ser

atribuída às TC e não às IC.

PD-L1 40x

H&E 40x

H&E 20x PD-L1 20x

IC raras a inexistentes entre

as TC na H&E

IC raras a inexistentes entre

as TC na H&E

Coloração das TC em forma de contas

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 17

Método de pontuação

O tecido de NSCLC corado com VENTANA PD-L1 (SP142) Assay será avaliado relativamente a coloração das TC e IC utilizando uma abordagem em vários passos

deﬁnida na Tabela 2.

• Pontuação das TC: a coloração das TC é pontuada de acordo com a percentagem de células tumorais viáveis que mostram coloração na

membrana, independentemente da sua intensidade. A coloração da membrana deverá ser visível na forma de coloração curvilínea ao longo da

membrana das células tumorais, mesmo que seja de qualidade granular ou em forma de contas. A coloração citoplasmática pode ser observada juntamente

coma coloração da membrana, mas não é incluída na pontuação das células tumorais.

• Pontuação das IC: as IC são pontuadas conforme a proporção da área de tumor ocupada pelas células imunitárias com coloração de PD-L1,

independentemente da sua intensidade. É incluída qualquer coloração das IC, independentemente do tipo de células ou da sua localização.

- Área do tumor: a área do tumor para a interpretação da PD-L1 (SP142) é deﬁnida como a área ocupada pelas células de tumor viáveis e os respetivos

estromas intratumoral e peritumoral contíguo associados (Figura16A-C). O tumor necrótico é excluído desta deﬁnição de área do tumor (Figura16D).

- Em amostras de tecido fragmentado, incluindo biópsias, em que é difícil distinguir entre os estromas intratumoral e peritumoral, apenas o estroma

queécontíguo aos ninhos tumorais individuais é incluído na deﬁnição de área do tumor; o estroma pertencente ao fragmento de tecido, mas que não

écontíguo ao tumor viável, é excluído (Figura16B).

H&E 1x

Área do tumor

Figura 16: A Área do tumor; B Área do tumor numa amostra de ressecção; C Área do tumor numa amostra de

biópsia; D Área do tumor numa amostra com necrose.

H&E 4x

Células

tumorais

Estroma

peritumoral

Área do tumor

Estroma

intratumoral

Área do tumor

H&E 1x

H&E 2x

Excluir a necrose

da área do tumor

18 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Pontuação de agregados de IC com coloração de PD-L1:

Analise a lâmina corada com H&E

quanto à presença de tumor, necrose,

adequação (pelo menos 50 células

tumorais viáveis*) e para avaliar

aáreade tumor.

Combine a coloração dos agregados

e estime a proporção da área do

tumor ocupada pelos agregados de IC

utilizando uma ampliação de 2x ou 4x.

Apontuação das IC para este caso é

≥1%. A secção Imagens de Referência

deverá ser utilizada como auxílio

napontuação.

Analise a lâmina com PD-L1 corada

a uma ampliação de 10x ou 20x e

conﬁrme o padrão de coloração

globalcomo sendo coloração das IC,

das TC ou de ambas.

Faça visualmente um círculo o mais

exato possível em redor dos agregados

de IC utilizando uma ampliação

de2xou4x.

H&E 1x

PD-L1 10x

PD-L1 4x

Apenas observada

coloração das IC

Agregados de IC

Área do tumor

*O estroma associado ao tumor não é necessário para a pontuação das TC.

A presença de estroma associado ao tumor é essencial para a

pontuaçãodas IC.

Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC 19

Pontuação das células individuais de IC dispersas com coloração de PD-L1:

A pontuação das células individuais de IC dispersas baseia-se na densidade da dispersão das células individuais, utilizando a secção de Imagens

deReferênciadeste guia.

H&E 10x PD-L1 10x

Densidade celular para dispersão de células individuais

IC é ≥1%

Densidade celular para dispersão de células individuais

IC é <1%

20 Guia de Interpretação do VENTANA PD-L1 (SP142) Assay para NSCLC — Algoritmo de pontuação em vários passos ≥1% TC ou ≥1% IC

Figura 18: Restos necróticos com coloração da PD-L1. A coloração de restos necróticos não deverá ser incluída na pontuação.

Figura 19: Restos intraluminais com coloração da PD-L1. Não deverá ser incluído na pontuação. Algumas células tumorais nas margens apresentam coloração da

PD-L1, devendo ser incluídas na pontuação de TC.

H&E 10x

H&E 20x

PD-L1 10x

PD-L1 20x

Métodos de pontuação: desaﬁos e armadilhas

1. Coloração em restos necróticos e restos intraluminais glandulares: os restos necróticos ou as células imunitárias na periferia de regiões necróticas

ou apoptóticas poderão mostrar coloração da PD-L1. Esta coloração poderá ser granular e ser confundida com coloração das IC. Esta coloração, bem como

acoloração de neutróﬁlos observada na forma de agregados, deverá ser excluída da pontuação (Figura18 e Figura19).

Coloração em

restos necróticos

Coloração de

restos intraluminais

Coloração de

células tumorais

nas margens

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